[发明专利]一种将TLR9应用于治疗冠状动脉粥样硬化的研究方法

说明书

一种将TLR9应用于治疗冠状动脉粥样硬化的研究方法，本发明涉及医疗技术领域；研究对象及分组；血标本采集；指标检测：心脏超声；冠心病患者术前、术后、无冠心病者一次心肌酶、CRP、BNP检测；冠心病患者术前术后、无冠心病者一次TLR9检测；统计学分析。通过用RT‑PCR检测冠心病患者和健康者外周血单核细胞中TLR9 mRNA的表达水平，明确TLR9与冠心病及其预后有无关系并进一步分析是怎样的关系，经皮冠脉介入治疗对TLR9表达的影响，为冠心病治疗确立新的靶点。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体涉及一种将TLR9应用于治疗冠状动脉粥样硬化的研究方法。

背景技术

动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是冠心病最基本的病理改变，以管壁内脂质积累、免疫细胞(巨噬细胞、T细胞和肥大细胞等)浸润为特征，早期病变主要表现为内皮下的脂质和巨噬细胞形成的泡沫细胞组成的脂纹的形成，随着时间的进展逐渐形成一个由纤维帽覆盖的坏死中心(由凋亡细胞、坏死细胞、细胞碎片以及胆固醇结晶等组成)，且斑块逐渐增大导致管腔狭窄可引起心肌缺血甚至心肌梗死。巨噬细胞作为AS斑块中最为典型的炎症细胞，在AS的发生发展过程中具有重要的作用。在不同局部微环境的影响下，巨噬细胞可活化为不同的亚型，主要表现为两种：具有促炎作用的经典激活型(M1型)和具有抗炎作用的替代激活型(M2型)，这是巨噬细胞一系列功能亚型中的两个极端表现。巨噬细胞的极化状态(M1/M2)则是决定巨噬细胞功能的主要标志，有研究发现冠状动脉粥样硬化与心外膜脂肪组织中的巨噬细胞极化状态密切相关。在机体不断变化的微环境中巨噬细胞可通过上调其Toll样受体(toll like receptors，TLRs)的表达而影响其活化表型，有研究表明TLR4可以诱导miR-155的表达，而miR-155可引起M1型巨噬细胞的表达上调及抑制M2型相关因子ArgI的表达。

巨噬细胞(M1/M2)的极化状态与其在AS斑块发生发展中的作用密切相关，其中M1型巨噬细胞主要存在于ApoE^-/-小鼠的早期斑块中，且多见于易损性斑块；而M2型巨噬细胞主要存在于晚期斑块中，多与动脉斑块稳定性增强有关。有研究显示TLR9的激动剂CpG-ODN可直接或间接激活免疫效应细胞(巨噬细胞和树突状细胞等)促进IL-12和TNF-α等Th1类细胞因子的分泌而诱导机体建立Th1型免疫反应，而巨噬细胞被Th1型相关细胞因子或脂多糖激活时可极化为M1型。此时，白介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和Ciita表达相对增加；巨噬细胞被Th2型相关细胞因子如IL-4和IL-13等激活时可极化为M2型，进而引起FIZZ1，Arginase-1和Ym1等相关因子的表达上调。目前关于TLR9是否可以影响巨噬细胞的活化表型尚不完全清楚。

近年来多数研究表明免疫反应及伴随其发生的慢性炎症反应在AS的发病机制中起到了重要作用。TLRs作为一类经典的模式识别受体，可通过识别病原微生物的相应组分启动机体的固有免疫反应，并在获得性免疫反应中也具有重要的作用。TLR9是一种细胞内的重要模式识别受体，主要分布于巨噬细胞、B细胞和树突状细胞等免疫细胞，其配体主要是病原体和自身DNA。免疫刺激序列(ISS)是一类人工合成的TLR9特异性激活剂，主要包括三种类型：CpG-ODN-A、B和C型，ODN1826属于B型CpG-ODN，可有效激活小鼠单核细胞的TLR9。IRS是一类具有免疫调节作用的DNA序列，可有效抑制TLR9的激活。有研究表明ISS可通过激活TLR9而引起Th1/Th2类细胞因子的平衡偏离，而Th1/Th2类细胞因子与巨噬细胞的活化表型密切相关，所以TLR9表达水平的改变可能与巨噬细胞的极化状态存在相关性。