[发明专利]一种提高重组枯草芽孢杆菌几丁寡糖产量的方法在审
| 申请号： | 201810325088.2 | 申请日： | 2018-04-12 |
| 公开（公告）号： | CN108504678A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 刘龙;堵国成;陈坚;凌美希;李江华;刘延峰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N15/54;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 几丁寡糖 重组枯草芽孢杆菌 出发菌株 枯草芽孢杆菌 磷酸氨基 葡萄糖合成酶 遗传工程领域 组成型启动子 葡萄糖 编码基因 代谢工程 反馈抑制 合成途径 前体物质 核酶 三糖 四糖 五糖 合成 调控 改造 生产 | ||
1.一种提高重组枯草芽孢杆菌生产几丁寡糖能力的方法，其特征在于，通过以组成型启动子Pveg调控6-磷酸氨基葡萄糖合成酶编码基因glmS表达。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述重组枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌168，pP43NMK-nodC。
4.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：克隆6-磷酸氨基葡萄糖合成酶编码基因glmS原始启动子两侧同源臂、标记基因及组成型启动子Pveg序列，通过融合PCR构建重组启动子替换片段；将重组启动子替换片段转化至枯草芽孢杆菌168，pP43NMK-nodC中。
5.一种积累几丁寡糖的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，以组成型启动子Pveg调控6-磷酸氨基葡萄糖合成酶编码基因glmS表达。
6.根据权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
7.一种构建权利要求5所述重组枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于，克隆6-磷酸氨基葡萄糖合成酶编码基因glmS原始启动子两侧同源臂、标记基因及组成型启动子Pveg序列，通过融合PCR构建重组启动子替换片段；将重组启动子替换片段转化至枯草芽孢杆菌168，pP43NMK-nodC中。
8.一种生产几丁寡糖的方法，其特征在于，应用权利要求5所述的重组枯草芽孢杆菌进行发酵。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵是在35～37℃发酵24～48h。
10.权利要求5或6所述的重组枯草芽孢杆菌在制备含几丁寡糖的产品方面的应用。
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