[发明专利]一种间充质干细胞无血清冻存液组合物

说明书

本发明公开了一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成。本发明的主要用于间充质干细胞的冻存，不含血清及血清替代物，无需梯度降温冻存，给间充质干细胞冻存带来了极大的便利，无需经过程序降温冻存，细胞经复苏，细胞有较高的复苏效率。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种间充质干细胞无血清冻存液组合物。

背景技术

间充质干细胞是细胞治疗中最常用的细胞，可用于组织的修复和临床治疗。在常规的细胞保存过程中都会加入血清成本，血清的加入可给细胞带来充足的营养，同时增加细胞的复苏成活率。血清冻存细胞的方法是实验室最常用的方法。但血清中含有一些异种蛋白用于临床的细胞含有异种蛋白可能引起病人的过敏反应，血清中还可能存在一些人蓄共患病病毒，可引起人蓄共患病的传播，另外，血清中含有一些外泌体，其也可以传播疾病，也不适用于外泌体研究的试验。干细胞在血清中冻存时间太久，复苏后也会对其分化产生影响。常规的冻存过程采用梯度降温冻存，其过程繁琐，耗时长，给细胞冻存带来了诸多不利。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种间充质干细胞无血清冻存液组合物。

本发明的技术方案如下：

一种间充质干细胞无血清冻存液组合物，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO10、甘油5和海藻糖5以100mL∶2～15g∶2～10g∶2～5g的比例组成；

上述间充质干细胞无血清培养基的pH为7.2～7.4，以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松1～100nM/L、氢化可的松0.1～10ug/mL、乙醇胺0.2～2ug/mL、FGF 5～50ng/mL、EGF 5～50ng/mL、亚硒酸钠0.01～0.1ug/mL、胰岛素0.5～1ug/mL、β-巯基乙醇10～50nM、转铁蛋白0.5～5ug/mL、维生素C 0.5～10ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素；

上述间充质干细胞无血清冻存液组合物的配制方法为：将DMSO、甘油和海藻糖溶解于间充质干细胞无血清培养基中，过滤除菌后即成。

在本发明的一个优选实施方案中，所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松5～20nM/L、氢化可的松8～10ug/mL、乙醇胺0.2～1ug/mL、FGF 10～20ng/mL、EGF 10～20ng/mL、亚硒酸钠0.03～0.07ug/mL、胰岛素0.5～0.8ug/mL、β-巯基乙醇40～50nM、转铁蛋白2～3ug/mL、维生素C 2～3ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。

进一步优选的，所述间充质干细胞无血清培养基以DMEM培养基为溶剂，并含有如下浓度的组分：地塞米松10nM/L、氢化可的松、10ug/mL、乙醇胺0.2ug/mL、FGF 10ng/mL、EGF10ng/mL、亚硒酸钠0.05ug/mL、胰岛素0.5ug/mL、β-巯基乙醇50nM、转铁蛋白2.5ug/mL、维生素C 2.5ug/mL、1×的L-Glu、1×的NEAA和1×的抗生素。

在本发明的一个优选实施方案中，所述抗生素为antibiotic-antimycotic。

在本发明的一个优选实施方案中，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶8～12g∶4～7g∶4～5g的比例组成。

进一步优选的，其配方由间充质干细胞无血清培养基、DMSO、甘油和海藻糖以100mL∶10g∶5g∶5g的比例组成。

本发明的有益效果是：