[发明专利]一种体外扩增I型天然细胞毒性淋巴细胞ILC1/NK的方法

权利要求书

1.一种体外扩增CD3-CD56+CD16+的NK细胞的方法，为用破骨细胞作为滋养层，联合使用抗CD16抗体和白介素-2扩增CD3-CD56+CD16+的NK细胞；

所述破骨细胞为成熟破骨细胞；

或所述CD3-CD56+CD16+的NK细胞来源于外周血、脐带血或其附属产品；

或所述抗CD16抗体为抗人源CD16抗体；

所述方法包括如下步骤：

1）先将所述CD3-CD56+CD16+的NK细胞和所述抗CD16抗体在细胞培养基中一次孵育；再向一次孵育体系中添加白介素-2，再次孵育，得到孵育后的CD3-CD56+CD16+的NK细胞；

2）将所述孵育后的CD3-CD56+CD16+的NK细胞和破骨细胞共培养，实现扩增CD3-CD56+CD16+的NK细胞或获得扩增18天后CD3-CD56+CD16+的NK细胞的培养液；

步骤1）中，所述CD3-CD56+CD16+的NK细胞加入密度为1-50百万个/毫升，所述抗CD16抗体的加入浓度为0.5-4微克/毫升，所述白介素-2的加入浓度为20-1000 IU/毫升；

或，步骤2）中，所述孵育后的CD3-CD56+CD16+的NK细胞和所述破骨细胞的数量比为1:1-5:1；

步骤1）中，所述细胞培养基为含有体积百分含量2.5-20%血浆的细胞培养基；

或，步骤2）中，所述共培养的方式为：每三天更换含有体积百分含量2.5%血浆的细胞培养基，且每次更换均添加终浓度为20-1000IU/毫升白介素-2；

步骤1）中，每次所述孵育时间均为2-10min；

步骤2）中，所述共培养的时间为大于等于18天。

2.由权利要求1所述方法得到的扩增18天后CD3-CD56+CD16+的NK细胞的培养液。

3.权利要求1所述的方法得到的扩增18天后CD3-CD56+CD16+的NK细胞的培养液在制备具有如下1）-6）中至少一种功能的产品中的应用：

1）治疗动物或人实体瘤；

2）提高患实体瘤的动物或人体内IFN-γ含量；

3）提高或恢复患实体瘤的动物或人的CD3-CD56+CD16+的NK细胞对实体瘤细胞的裂解杀伤能力；

4）提高实体瘤对化疗药物敏感性；

5）抑制实体瘤细胞的生长和转移；

6）延长患实体瘤的动物或人的生存期。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述实体瘤为低分化实体瘤；

或所述低分化实体瘤为胰腺癌；

或所述实体瘤细胞为低分化实体瘤细胞；

或所述低分化实体瘤细胞为胰腺癌干细胞。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述具有如下1）-6）中至少一种功能的产品为试剂盒。