[发明专利]针对结核病筛查与诊断的组合血清标记物检测试剂

说明书

本发明涉及生物医学和临床诊断技术领域，公开了一种针对结核病筛查与诊断的组合血清标记物检测试剂及其在结核病筛查、诊断、治疗反应监测中的应用。本发明检测试剂由同时检测下述4种血清标记物的检测试剂组成：结核分枝杆菌Ag85B抗体、白细胞介素‑6、白细胞介素‑8、白细胞介素‑18。本检测试剂适用于酶联免疫吸附测定、基于Luminex的多分析谱分析法、单分子蛋白阵列检测法、侧流免疫测定和核酸适配体技术。本发明检测试剂具有适用面广、使用简便快捷、结果准确、检测成本低等特点，经临床测试，利用本发明检测试剂进行结核病筛查，其诊断结果准确性完全达到了世卫组织对结核病筛查技术临床应用的相关要求。

技术领域

本发明涉及生物医学和临床诊断技术领域，尤其涉及一种针对结核病筛查与诊断的组合血清标记物检测试剂及其在临床治疗中的应用。

背景技术

结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核杆菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。作为当今世界的第一大传染性疾病，每年结核病的感染人数达到20亿人，因结核病死亡的患者人数不少于150万人，其致死人数仍高于其他任何一种传染病，导致此情况的重要原因之一是由于结核病经由飞沫传播，扩散速度极快，预防非常困难。因此，快速准确地筛查和诊断结核病可以为患者赢得宝贵的治疗时间，以便提供及时的治疗从而减少死亡事件的发生，同时，也可明显缩短患者带菌时间，从而在很大程度上减少疾病传播和扩散。

由于结核病缺少特征性的体征和症状，目前主要依靠实验室检测方法进行诊断，通常检测患者痰液中的结核菌。然而，痰液检测仍具有很大的局限性：(1)部分患者没有痰液，造成标本获得困难，并限制了适用人群；(2)痰液成分不稳定，在不同个体或同一个体不同留样时间之间的变化很大，而且极易混入唾液，从而影响检测结果的准确性；(3)痰液的处理不易标准化，导致其检测灵敏度降低；(4)部分检测需要进行结核菌培养，造成检测耗时长，易延误诊断，并增加了检测成本。

根据免疫学理论，人体感染结核后会出现相应的免疫反应，表现为体内血清标记物的变化，另一方面，与痰液相比，血液样本成分相对稳定，更容易获取，且其处理易于标准化。根据以上思路，美国Broad研究院(The Broad Institute)于2012年在美国申请了发明专利“Methods and devices for tuberculosis diagnosis using biomarkerprofiles.”(US 9702886B2)，并于2017年获得授权，该专利首次提出了20个基于血液的生物标记物可以用于结核病的诊断检测。该专利的主要发明人Rushdy Ahmad博士也是本发明的发明人之一。

然而，研究人员在此后数年的深入研究中发现：上述专利中公开的标记物及其组合尚无法达到世界卫生组织(WHO)于2014年提出的结核病快速筛查诊断要求，即满足敏感性(患者中检测呈阳性的比例)≥90％，同时特异性(无疾病人群中检测呈阴性的比例)≥70％的标准。另一方面，鉴于上述专利所涉及的标记物数量过多，若全部采用不仅会导致检测成本过高，而且由于检测流程过于繁杂而使其失去了现实可行性，因而不具有临床应用价值。

另外，据我们所知，目前尚未见到其他基于血清标记物的诊断技术应用于结核病筛查与诊断的相关报道，也没有类似的检测技术或检测试剂盒正式应用于临床实践中。

发明内容

为了克服现有结核病诊断方法灵敏度低、准确性不理想、检测耗时长、有效样本难获得、适用人群窄、样本成分不稳定、样本处理难以标准化、检测成本高等缺陷。本发明在上述美国专利(US 9702886B2)的基础上，通过大量的筛选验证实验，研制获得了一种新的针对结核病筛查与诊断的组合血清标记物检测试剂。

本发明针对结核病筛查与诊断的组合血清标记物检测试剂，其特征在于：所述检测试剂是由同时检测下述4种血清标记物的检测试剂组成的：结核分枝杆菌Ag85B抗体、白细胞介素-6、白细胞介素-8、白细胞介素-18。