[发明专利]甲壳素脱乙酰基酶高产菌株及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及甲壳素脱乙酰基酶高产菌株及其应用。所述甲壳素脱乙酰基酶高产菌株具体为马红球菌(Rhodococcus equi)F6，保藏编号为CGMCC No.14861。该菌株产甲壳素脱乙酰基酶的速度极快，是目前首次报道可生产甲壳素脱乙酰基的马红球菌，也是现有技术中所有发酵产甲壳素脱乙酰基酶最快的菌株，易于大规模培养。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及甲壳素脱乙酰基酶高产菌株及其应用。

背景技术：

甲壳素又名几丁质，学名为(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-葡聚糖，是自然界生物所含有的一种含量仅次于纤维素的氨基多糖，主要存在于无脊椎动物，如虾、昆虫、海藻、真菌及酵母中。但是甲壳素不溶于水、酸、碱和有机溶剂，所以其没有太大的商业价值，而其脱去乙酰基后的产物壳聚糖则广泛应用于医药、食品、化工、化妆品等行业。目前生产壳聚糖主要使用的化学法存在诸多问题，例如，反应时间长、能耗大、产品质量不稳定，特别是排放物会造成巨大的环境污染。

甲壳素脱乙酰酶可以脱掉甲壳素上的乙酰基生产脱乙酰度稳定、分子质量分布范围窄的壳聚糖产品，为解决化学法生产壳聚糖存在的问题提供了一条新的途径。目前国内外关于甲壳素脱乙酰酶产生菌的研究仅有少量的文献报道，微生物来源的甲壳素脱乙酰酶也主要以真菌为主，细菌较少。

目前，国内外涉及利用筛选到的天然微生物发酵法生产甲壳素脱乙酰基酶的报道相对较少，国内CN102676485A、CN104450832A和CN104498365A三个专利关联性相对较高。其中CN102676485A公开了用短柄梨孢霉发酵培养90-100小时，获得了甲壳素脱乙酰酶；CN104450832A公开了利用嗜热芽孢杆菌发酵培养60-72h，获得了甲壳素脱乙酰基酶；；CN104498365A公开了利用菌株Aspergillus versicolor X发酵72-100h，获得了甲壳素脱乙酰基酶粗酶液。

但目前微生物发酵生产甲壳素脱乙酰基酶存在发酵时间长、酶活力低等一系列问题，所以目前该酶一直未能实现产业化。因此，从自然环境中筛选性能优良的产酶新菌种仍是解决CDA工业化应用的重要课题之一，也具有重要的实用价值和学术研究价值。

发明内容：

针对现有技术的不足，本发明旨在提供一株能高产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌及其发酵方法和应用，本发明提供的高产甲壳素脱乙酰基酶的菌株产酶速度极快，是目前首次报道可生产甲壳素脱乙酰基的马红球菌，也是现有技术中所有发酵产甲壳素脱乙酰基酶最快的菌株，易于大规模培养。

本发明的第一个目的在于提供一株高产甲壳素脱乙酰基酶的马红球菌(Rhodococcus equi)F6，该菌株已于2017年11月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.14861。

所述马红球菌(Rhodococcus equi)F6的理化特性如下：革兰氏阳性菌，LB培养基上菌落呈球形，潮湿，菌落颜色为柔和的粉红色。

本发明的第二个目的在于提供所述的马红球菌CGMCC No.14861在生产甲壳素脱乙酰基酶的中的应用。

本发明的第三个目的在于提供一种采用红球菌CGMCC No.14861发酵生产甲壳素脱乙酰基酶的生产方法，具体如下：

(1)种子培养

培养条件：搅拌转速为160-200rpm，温度为30-37℃，发酵12-24h；

种子培养基：蛋白胨5-10g/L，酵母浸粉3-8g/L，氯化钠5-10g/L，余量为水，pH6.0-7.0；

(2)发酵培养

发酵条件：接种量2-10％，搅拌转速为160-200rpm，温度为30-40℃，发酵6-10h；