[发明专利]一种人轮状病毒VP8重组蛋白以及利用该VP8重组蛋白的人用轮状病毒疫苗有效

专利信息
申请号: 201810329349.8 申请日: 2018-04-13
公开(公告)号: CN108546288B 公开(公告)日: 2021-09-17
发明(设计)人: 陈德祥;董丽春 申请(专利权)人: 成都迈科康生物科技有限公司
主分类号: C07K14/14 分类号: C07K14/14;A61K39/15;A61P31/14
代理公司: 北京市诚辉律师事务所 11430 代理人: 范盈
地址: 610041 四川省成都市高新区科园*** 国省代码: 四川;51
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摘要:
搜索关键词: 一种 轮状病毒 vp8 重组 蛋白 以及 利用 疫苗
【说明书】:

发明提供了一种人轮状病毒VP8重组蛋白,所述VP8重组蛋白的氨基酸序列包括人轮状病毒VP8蛋白(以下简称为VP8蛋白)氨基酸序列和外源多肽氨基酸序列,所述外源多肽的等电点小于等于5。本发明还提供了基于该VP8重组蛋白制备的人轮状病毒疫苗。与现有技术相比,本申请提供的VP8重组蛋白通过VP8蛋白与破伤风毒素和/或白喉毒素蛋白中含负电荷的氨基酸的多肽片段融合表达,提高大肠杆菌表达的轮状病毒VP8蛋白的水溶性和产量,并且所得到的融合蛋白具有很好的免疫能力,所制备得到的疫苗具有很好的效果。

技术领域

本发明涉及疫苗领域,尤其涉及一种人轮状病毒疫苗以及该疫苗中所涉及的轮状病毒重组蛋白。

发明背景

轮状病毒是严重的脱水性腹泻的最常见原因,造成巨大的经济损失。几乎每个孩子在5 岁之前便已感染了轮状病毒。目前全世界每年有近二十万小于5岁的儿童死于轮状病毒腹泻,包括中国的约两万儿童。疫苗是预防轮状病毒腹泻的最经济也是最有效的方法。

早在1998年,惠氏(Wyeth)推出了口服的轮状病毒疫苗-Rotashield。使用一年期间,发现接种的儿童发生肠套叠的风险增高,因此、产品不得不撤市。后来Merck和GSK分别推出了口服轮状病毒活疫苗,这两个产品在全球80多个国家广泛应用,对控制轮状病毒造成的严重的脱水性腹泻,以及其引起的住院和儿童死亡起到非常好的保护作用。但是这些疫苗在发达国家的保护效果有比较好。对发展中和落后国家的人群的疗效不如发达国家的高,平均有效性在50%左右。其保护性的地区差异的原因并不清楚,可能的因素包括母乳中的抗体对疫苗病毒的生长抑制作用,儿童营养不良造成的肠道发育不完善,和不同的肠道微生物菌群等综合因素对疫苗保护性的干扰。其它口服减毒活疫苗,肠如霍乱和脊髓灰质炎,也有相似的问题。这两个口服轮状病毒活疫苗分别在6-7万的儿童开展了3期临床试验,没有发现有引起肠套叠的风险。但是在大批的人群使用后也发现不同程度增加了肠套叠的风险。中国有一个口服的轮状病毒疫苗产品在市场销售。是否与国外的产品有共同的弊病有待进一步研究。

由于口服的轮状病毒疫苗产品的上述缺陷,人们希望研制可以注射的状病毒疫苗其它疫苗的经验证明注射的疫苗的保护性无地区差异,也不会引起无肠套叠。

开发注射的轮状病毒疫苗可选的保护性抗原主要是外壳蛋白VP7和VP4蛋白质。因为这两个蛋白分别能够诱导中和抗体。VP7作为疫苗开发比较复杂,因为在人的致病轮状病毒毒株中,有至少8-10个不同的VP7型,即G-型(G1-6,8,9等)。不同的地区流行的毒株G- 型不同,而且同一个地区每年流行的毒株的G型也往往不同。不同G-型之间相互之间没有交叉保护作用。意味着基于VP7蛋白的疫苗是一个成本昂贵的多成份的产品。相对而言,基于VP4蛋白的疫苗的可行性更高。因为人致病的轮状病毒几乎只有三个不同的VP4型别,即 P[4],P[6],和P[8]型。同一个P-型的不同毒株之间VP4蛋白之间的氨基酸顺序也有差别,但差异不会超过5%。不过针对任何一个P-型的VP8的抗血清能够中和同一个P-型的不同毒株。另外P[4]和P[8]之间的蛋白的氨基酸顺序非常相似,有一定的交叉保护作用。所以一个两价或三价的基于VP4蛋白的疫苗是全球通用的轮状病毒疫苗,可以预防几乎所有的毒株。

VP4蛋白作为病毒表面突出的蛋白可以作为疫苗用的另外一个原因是VP4在病毒感染人的细胞过程中是一个非常重要的毒性因子。起毒性作用非常类似于流感病毒的血凝素。轮状病毒通过VP4蛋白结合到宿主细胞表面的受体,然后VP4被胰酶切成VP5和VP8两个片段。 VP5连同病毒颗粒侵入到细胞内,VP8作被留在细胞外。针对VP4的中和抗体能够阻止病毒与人体细胞表面受体的结合和病毒向细胞内侵入,以及细胞之间的扩散。其保护机理非常类似于流感疫苗的保护机理。总之流感病毒的血凝素作为有效的疫苗的先例是支持开发基于 VP4蛋白的轮状病毒疫苗有力证据。

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