[发明专利]IgG抗原表位及其作为靶点的应用

说明书

本发明公开了IgG抗原表位及其作为靶点的应用。该IgG抗原表位，为非B细胞来源的IgG的C_H1结构域，且在该结构域的Asn162位点有N‑糖基化唾液酸修饰，其抗原功能的实现必须依赖于该位点的唾液酸化。本发明还提供了该IgG抗原表位作为药物作用靶点在制备诊断和/或治疗上皮性肿瘤的药物中的应用。另外我们研究得出，该抗原作为药物靶点的功能依赖于其Asn162位点的唾液酸化，而该位点的唾液酸化又必须依赖于唾液酸转移酶ST3GAL4，表明该酶可以作为药物作用靶点用于制备肿瘤治疗药物。另外，整合素β4与含有上述抗原表位的IgG共表达和共定位，鉴于IgG的功能，因此可以作为标志物用于制备辅助检测上皮性肿瘤的药物。

技术领域

本发明属于免疫学中肿瘤的诊断和治疗技术领域，涉及非B细胞来源的IgG，具体是一种IgG抗原表位及其作为靶点的应用。

背景技术

RP215单克隆抗体的来源及研究现状：加拿大哥伦比亚大学的Lee课题组早在上世纪80年代，为了获得特异性识别卵巢癌的单克隆抗体，曾用卵巢癌细胞系提取的蛋白免疫动物，获得了近3000株杂交瘤细胞，在筛选的过程中发现，其中有一株杂交瘤细胞，称之为RP2015，能够很好地识别卵巢癌细胞而不识别正常卵巢细胞，但当时不清楚其所识别的抗原是什么，因此暂时对其识别的抗原命名为“CA215”。后来发现，RP215不但能够很好地识别卵巢癌，同时在对其他类型的肿瘤细胞识别中也显示了良好的特异性，由此将CA215定义为“pan-cancer-marker”。20017年，Lee课题组对CA215进行了鉴定。他们用亲和层析的方法，从卵巢癌细胞系培养上清中获得了大量的“CA215”，质谱鉴定所提供的32条肽段均为IgG的重链，为了进一步确认这一结果，他们又用纯化的“CA215”作为抗原制备了5株特异性单抗，实验结果证实，所有5个单抗都识别IgG分子。证明了CA215是癌细胞表达的IgG。随后的结果证实，癌细胞表达的IgG在糖基化修饰与循环中IgG有明显差异。RP215识别的表位正是这类IgG重链可变区特有的糖基类相关表位(参见中国专利公开号102901817A)。

也就是说，RP215不能识别B淋巴细胞分化为浆细胞后分泌的IgG(循环IgG)，但能识别非B细胞表达的IgG。研究表明RP215识别的IgG(以下简称RP215-IgG)可被多种不同谱系起源的细胞表达，但表达水平低于非B细胞起源的肿瘤细胞，因此被统称为非B细胞来源的IgG(non B-IgG)。non B-IgG在结构和功能上都与传统认识上的B细胞来源的IgG有很大不同。

被肿瘤干细胞样细胞过度表达的RP215-IgG，倾向定位于细胞表面和细胞之间的连接，特别是黏着斑结构。此外，高水平的RP215-IgG细胞对细胞外基质(ECM)具有较高的黏附能力，在体外和体内都具有较高的迁移和侵袭力，增强肿瘤干细胞自我更新和肿瘤形成能力。然而，RP215识别的独特抗原表位的具体结构、性质以及由RP215-IgG驱动的肿瘤发生发展的详细机制仍然未知，因此也就无法制备出除了RP215以外的、其他的以该IgG为特异性靶点的诊断或者治疗药物。

经过我们之前的努力，已经清楚认识到能够被RP215特异性识别的IgG为非B细胞来源的IgG，且该IgG上被识别的位点高度唾液酸化，唾液酸化的糖基与O-糖基化没有关系。这种特殊的唾液酸化的IgG能够作为标志物来识别干细胞或者祖细胞，进而根据该糖蛋白来制备相关制剂。

鉴于非B细胞来源的IgG与上皮癌细胞的密切相关性，进一步研究该IgG的分子结构将更有利于加强对多种恶性肿瘤的干预。

发明内容

本发明的目的是对非B细胞来源的IgG分子结构及功能进行更进一步的研究，分析出具体的可以作为靶标的抗原表位，提供该抗原表位的新用途。

通过相关蛋白酶消化分析非B细胞来源的IgG，并且通过糖基化分析和蛋白功能位点的分析，最终发现非B细胞来源的IgG，其与肿瘤相关的功能主要依赖于特殊位点的唾液酸化。