[发明专利]猪瘟病毒单克隆抗体HK24及医用用途

说明书

本发明提供了一种猪瘟病毒单克隆抗体HK24及医用用途，可用于制备诊断或检测猪瘟病毒试剂；也可用于制备预防治疗猪瘟生物制剂；对于减少猪瘟病毒给养猪业造成的经济损失具有重要意义。

技术领域

本发明提供了特异性结合、并能有效中和猪瘟病毒的抗体HK24及其序列，属于生物技术和分子免疫学领域。

技术背景

抗体（antibody，Ab）是介导体液免疫的重要效应分子，在病毒感染过程中主要通过与相应抗原特异性结合阻止病原微生物黏附靶细胞受体，对机体起保护作用。抗体的发现不仅在人类疾病诊断、治疗和有害物质的分析检测等领域做出了巨大贡献，而且是生物医药的重要组成部分，继重组蛋白后引领了第二次生物医药产品浪潮。

近年来，smart-seq2技术的出现，实现了单细胞全长cDNA的获得，为抗体基因的获取提供了可能。避免了冗杂的杂交瘤细胞筛选过程，且所产生的抗体不再限制于抗鼠的抗体，为研发抗体药物及疾病的免疫治疗提供了基础。

猪瘟（Classical swine fever, CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fevervirus, CSFV）感染引起猪的一种烈性传染病，具有急性、热性、高度接触性等特点，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病，严重威胁养猪业发展。CSFV是一种含有囊膜的单股正链RNA病毒，属于黄病毒科瘟病毒属成员，基因组长约12.3kb，编码4个结构蛋白C（p14）、E0（gp48）、E1（gp33）、E2（gp53）及7个非结构蛋白p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。其中，糖蛋白 E2是最主要的免疫原性蛋白，可诱导机体产生中和性抗体，保护机体免受病毒的攻击。因此本发明利用合成的E2蛋白中保守表位5-tamra-CTAVSPTTLRTEVVK与FITC-anti-pigIgG同时标记细胞，高效筛选表位特异性抗体分泌细胞，利用smart-seq2技术获得猪瘟病毒特异性抗体基因的序列，成功表达获取了具有中和活性的猪瘟病毒特异性单克隆抗体，为猪瘟病毒血清学的快速诊断，开发猪瘟新型疫苗及猪瘟的防治提供了候选者。

发明内容

本发明公开了一种猪瘟病毒单克隆抗体HK24，该抗体能够结合猪瘟病毒E2蛋白，并且有效中和猪瘟病毒。

本发明所述的一种猪瘟病毒单克隆抗体HK24，包括轻链和重链，其特征在于：

所述单克隆抗体的重链全长氨基酸序列为SEQ ID 1，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 3；

所述单克隆抗体的轻链全长氨基酸序列为SEQ ID 5，可变区氨基酸序列为序列表中的SEQ ID 7；

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK24，其特征在于：

能够编码抗体重链全长核酸序列为SEQ ID 2；所述抗体的重链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 4；

能够编码抗体轻链全长核酸序列为SEQ ID 6；所述抗体的轻链可变区包含核苷酸序列为SEQ ID 8。

所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab’、F (ab’)₂、Fd、Fv、Fc、dAb、互补决定区片段、单链抗体。

所述的单克隆抗体包括非CDR区，且所述非CDR区来自不是猪类的物种。

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK24在诊断或检测猪瘟病毒试剂中的用途。

所述的猪瘟病毒单克隆抗体HK24在预防治疗猪瘟生物制剂中的用途。

本发明猪瘟病毒单克隆抗体HK24的制备方法，包括以下步骤：在猪21-30日龄和65日龄时分别注射1次猪瘟疫苗（兔化弱毒株，吉林正业生物制品股份有限公司），间隔一周后加强免疫一次，共免疫三次；