[发明专利]一种用于HLA-B基因扩增、基因分型的引物组、试剂盒和方法

说明书

本发明公开一种用于HLA‑B基因扩增、基因分型的引物组、试剂盒和方法，属于基因检测领域。本发明提供的用于HLA‑B基因扩增的引物组，根据HLA‑B基因的8个外显子区设计至少两组引物，利用所述引物对所述HLA‑B基因进行PCR扩增，得到基因片段长度小于1.5kb的产物；通过上述引物PCR扩增HLA‑B基因，使得扩增产物的基因片段长度小于1.5kb，对模板的完整性要求降低，扩增效率高，扩增反应时间短，成本降低，可以满足大规模样本HLA‑B基因的扩增或基因分型的需求，为临床HLA配型提供更加准确的依据，为患者提供合适的移植供者，降低移植过程中的排异反应，提高器官移植的成功率和患者生存率。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体涉及一种用于HLA-B基因扩增、基因分型的引物组、试剂盒和方法。

背景技术

人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，简称HLA)，编码基因位于6号染色体短臂上，全长约4000Kb，是目前所知人类最复杂的遗传多态性系统，与人类的免疫系统功能密切相关。HLA又被称为移植抗原，是决定移植排斥反应高低的重要因素。在进行器官移植时，供者和受者之间HLA相容程度越高，排斥反应的发生率就越低，移植成功率和移植器官患者长期存活率就越高；反之，就越容易发生排斥反应。因此，对HLA进行高效准确的分型对器官移植至关重要。

HLA基因分成三类：I类、II类和III类基因。其中，I类包括：HLA-A、HLA-B、HLA-C基因；II类包括：HLA-DRB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1、HLA-DPB1基因。

HLA分型方法包括血清学分型法、细胞学分型法以及分子生物学分型法。随着分子生物学技术的飞速发展，传统的血清学和细胞学分型方法已逐步被分子生物学分型方法所取代。现阶段，HLA分子分型方法主要有：多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)，多聚酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)，多聚酶链反应-序列特异性寡核苷酸反应(PCR-SSOP)，基因芯片和测序分型(PCR-SBT)等。

以聚合酶链反应(PCR)为基础的HLA-B测序分型(PCR-SBT)方法是最准确可靠HLA-B基因分型方法，是世界卫生组织(WHO)推荐的HLA-B基因分型方法的“金标准”。

国际专利文献WO2011035550A1公开一种HLA基因扩增和基因分型方法及其相关引物，该专利还提供了HLA基因分型的方法以及所述方法中使用的扩增引物对和测序引物，应用本发明提供的扩增引物对和测序引物以及基因分型方法，能够在扩增全长基因的基础上进行基因分型，但是该技术使用一对引物对HLA-B基因的8个外显子进行扩增，HLA-B的全长基因为2.5kb，片段相对较长，因此扩增难度比较大，对DNA模板的要求较高，同时需要高保真的酶，高保真酶的成本较高，不能满足大规模样本HLA-B基因分型的需求。

因此，需要一种成本较低，准确率和分辨率高的HLA-B基因分型方法，用于大规模样本的HLA-B基因分型。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于存在的HLA-B基因全长片段较长，DNA模板完整性要求高，扩增难度大，成本高，不能满足大规模样本HLA-B分型的问题，本发明提供一种用于HLA-B基因扩增、高分辨分型的引物组、试剂盒和方法。

为此，本发明提供了一种用于HLA-B基因扩增的引物组，根据HLA-B基因的8个外显子区设计至少两组引物，利用所述引物对所述HLA-B基因进行PCR扩增，得到基因片段长度小于1.5kb的产物。

所述的用于HLA-B基因扩增的引物组，根据HLA-B基因的8个外显子区设计两组引物，采用第一组引物PCR扩增HLA-B基因第1个外显子至第3个外显子，采用第二组引物PCR扩增HLA-B基因第4个外显子至第8个外显子。

所述的用于HLA-B基因扩增的引物组，所述第一组引物的核苷酸序列包括如下(a1)-(a4)序列中的任意一种：