[发明专利]一种宋内志贺菌特异核苷酸PCR检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种对宋内志贺菌的wzy和wbgV基因特异核苷酸的检测应用试剂盒，所述核苷酸为：SEQ ID NO:1所示的核苷酸和/或SEQ ID NO:2所示的核苷酸；SEQ ID NO:3所示的核苷酸和/或SEQ ID NO:4所示的核苷酸。这些核苷酸可用于制备检测宋内志贺菌的PCR试剂盒。本发明对宋内志贺菌的wzy和wbgV基因特异的核苷酸及包含该核苷酸的PCR试剂盒的实用性强。PCR试剂盒具有配制方法简便，检测周期短、速度快，可操作性强，准确性高，灵敏度高的特点，且易于商品化生产，检测成本却相对较低。

技术领域

本发明涉及一种对宋内志贺菌 (Shigella sonnei) 的wzy基因(假定多糖聚合酶，Putative polysaccharide polymerase，以下简称wzy基因)和wbgV基因（假定蛋白）特异的核苷酸及其应用，通过这些特异的核苷酸可以准确的将宋内志贺氏菌从其他类志贺邻单胞菌13个血清型中区别鉴别出来。

背景技术

宋内志贺菌是志贺菌四个群之一，抗原单一，只有一个血清型。在我国，宋内志贺菌是引起细菌性痢疾的主要致病菌。宋内志贺菌有I相和II相两个交叉变异相。I相呈S菌落，对小鼠有致病力，多自急性期感染病人标本中分离得。II相为R型菌落，对小鼠不致病，常从慢性患者或带菌者检出。

目前对类志贺邻单胞菌的分型鉴定主要根据有：细菌的形态学特征、细菌的生理生化特征、血清学反应等方法，类志贺邻单胞菌的O抗原分型属于血清学反应的一种。由于环境和抗体的多样性，形成了O抗原的多样性，而根据O抗原的多样性可以对类志贺邻单胞菌的不同菌株进行分型鉴定。

在类志贺邻单胞菌的若干个已知的血清型中O17与宋内志贺菌较难鉴别，还没有快速鉴别的方法。所以本发明旨在先将O17类志贺邻单胞菌与宋内志贺菌从其他类志贺邻单胞菌血清型区分开来，再将O17类志贺邻单胞菌与宋内志贺菌区分开来。

随着分子技术特别是PCR技术的发展，许多分子生物学方法被用于类志贺邻单胞菌分子分型和流行病学研究。目前已用于类志贺邻单胞菌分型的4种常用分子分型技术为：随机扩增多态性 DNA (Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)、脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis，PFGE)、扩增片段长度多态性(Amplified fragmentlength polymorphism，AFLP)、核酸测序分型(Sequence-based typing，SBT)。由于其一次即可分离出大量DNA片段，且具有操作简便，重复率好等优势，先后用于类志贺邻单胞菌分子分型和流行病学调查。

聚合酶链式反应技术(Polymerase chain reaction，简称PCR技术)作为微生物检测的技术目前正在得到认同和推广，该技术相对于传统的方法有高通量、检测速度快、特异性强、灵敏度高等优点，只需对样品进行简单的预增菌或增菌过程，再通过离心及裂解制备细菌DNA模板，就可以在高特异性引物介导下的PCR过程中扩增目标序列，达到检测样品中是否含有待测的致病性微生物的目的。PCR的扩增过程仅需2个小时。这对检验检疫部门和临床检验无疑极大提高了工作速度和降低了工作成本。

系统的分析显示出wzy基因是O抗原基因所独有的特征基因，可以被用来作为分子分型的目标基因。wbgV基因参与脂多糖的O抗原的合成，也可以作为目标基因鉴别不同的血清型。

发明内容