[发明专利]一种小鼠成纤维细胞及其用途

说明书

本发明公开了一种小鼠成纤维细胞及其用途。属于细胞生物学领域。该细胞命名为小鼠成纤维细胞MFC/HL‑041，保藏编号为CCTCC NO：C201714。经药物丝裂酶素C或放射线辐照处理后的小鼠成纤维细胞用于正常原代上皮细胞与原代肿瘤细胞的分离和传代培养。由此获得的人肺正常和肺癌的原代上皮细胞在显微镜下观察，状态鲜活，排列紧密、细胞界限清晰、立体感强、多角型的上皮细胞。可用于人或动物正常细胞的生理学研究，体外正常细胞的病毒感染模型，体外正常细胞针对不同药物的药敏检测，以及癌症病人个体化治疗的药物筛选和抗癌新药的研发。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种小鼠成纤维细胞及其用途。

背景技术

众所周知，人体重要的器官是很难被替换的，而且这种特异性分化器官的组 成细胞也是很难再生的，更不用说在体外进行连续的培养增殖。因此，人们对于 机体正常细胞功能的认识，绝大多数主要来自于体外培养的“癌细胞”所得到的研 究结果，而非源于真正的正常细胞。为了在体外进行原代细胞的培养，目前国外 尝试通过遗传操作，如通过导入病毒(SV40T或HPV16E6E7)或细胞癌基因来 建立各种永生化细胞，获得所谓“正常”的细胞系。然而，该方法虽然可以延长体 外细胞存活的寿命(代数)，但是遗传操作的最大缺点是会改变这些细胞的遗传 背景和表型，以致让这些正常细胞丢失其正常生理功能，如p53和pRB信号通 路常常被抑制，因而得到的实验数据可靠性大大降低。由于目前缺乏有效的体外 培养原代上皮细胞的技术，上述经遗传操作永生化的细胞在当今世界医学和生命 科学领域中仍然备受青睐，在非癌症研究领域，它们就代表着最初来源的“功能” 性的组织或器官；在癌症研究领域，它们还常常被用来作为“正常细胞”的对照， 并且在市场上的价格还非常昂贵。综上所述，目前急需解决的问题是，如何快速、 有效地进行组织器官来源的原代上皮细胞的增殖以及这些上皮细胞的传代培养， 并且能有效地延长上皮细胞的培养代数，同时又不能改变细胞的遗传背景。

传统的人正常上皮细胞原代培养方法存在培养出的细胞活性差、培养率低、 易污染和操作繁琐等缺点。为了解决此类问题扩大人类正常上皮细胞原代培养的 研究及应用，近年来国内外的许多研究人员对哺乳动物正常上皮细胞尤其是人正 常上皮细胞的原代培养过程进行了不断改进和新的探索。此外，人类原代上皮组 织通常来源于患者组织，除基于患者对手术及实验方案知情同意外，必须通过医 院伦理委员会批准，因此人类原代上皮细胞来源非常有限。培养原代细胞是指从 活体里取得器官组织或者细胞后立即用于培养，整个过程包括活体取材、分离提 纯、细胞培养、细胞传代和生物学鉴定等基本部分。其中，人类上皮细胞的培养 是所有类型细胞中培养难度较大的，培养出的细胞在细胞数量、活性、培养周期、 传代保存上都受到诸多限制。上皮细胞是分布在体表或腔道表层的一类细胞，在 不同部位的上皮细胞功能存在差异，如在体表的上皮细胞具有保护功能，在消化 道或呼吸道表层的上皮细胞除具有保护功能外还包含分泌、排泄和吸收的作用。 有研究发现某些癌症是由上皮细胞的病变所引发的，如卵巢癌来源于卵巢表面上 皮的病变。由此可知，建立优越的原代上皮细胞的培养体系，尽可能地培养出在 结构和功能上与体细胞相近的正常上皮细胞、原代肿瘤细胞显得尤为重要。然而 就现有的上皮细胞培养技术来看，还尚未建立稳定的共培养体系用以提供大量的 优质的上皮细胞为相关实验研究提供研究模型。