[发明专利]2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的新用途

说明书

本发明公开一种2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚的新用途，即2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚在提高雨生红球藻细胞中虾青素含量中的应用。培养雨生红球藻至细胞浓度为1×10⁶~1.5×10⁶个/mL时，加入不含氮源的BBM培养基，稀释雨生红球藻细胞至2×10⁵~3×10⁵个/mL，即得雨生红球藻藻液；采用无水乙醇配制的2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚母液，加入到雨生红球藻藻液中得到诱导雨生红球藻藻液并光照培养；测定雨生红球藻细胞中虾青素的含量。适量浓度的2,6‑二叔丁基‑4‑甲基苯酚能有效提高虾青素的产量，从而增加雨生红球藻中虾青素的产率。

技术领域

本发明涉及2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的新用途，属于生物工程技术领域。

背景技术

雨生红球藻（绿藻类，团藻目）是一种单细胞淡水微藻分布于世界各地，是公认的虾青素的最佳天然来源，也是天然虾青素的主要生产生物，含量最高可达细胞干重的5 %。天然虾青素（3,3′-二羟基-4,4′-二酮基-β,β′-胡萝卜素）是一种红色酮类胡萝卜素，有13个单双键交替排列的共轭键，因此具有强抗氧化性、中和自由基、清除活性氧的特性，广泛应用在食品、饲料、化妆品以及医药行业，具有较高的商业价值。虾青素包含两个手性中心，存在三个同分异构体，分别是（3S，3’S）、（3R，3’S）和（3R，3’R）。雨生红球藻生物合成的是3S，3’S立体异构体，是最有价值的一个。雨生红球藻中虾青素的生物合成与胁迫条件下细胞内储备的脂滴有直接的关联，从生化角度分析虾青素是由甘油醛- 3 -磷酸和丙酮酸经类胡萝卜素途径合成的，这两种化合物都是光合作用或糖酵解的产物，合成后进入非甲羟戊酸（MEP）产生重要中间体异戊烯焦磷酸，用于合成虾青素在内的所有类胡萝卜素。目前，市售的虾青素超过95 %是人工合成的，雨生红球藻产生的天然虾青素约占市售的1 %，然而天然虾青素的抗氧化能力是合成虾青素的20倍，且合成虾青素尚未批准供人类食用。此外，由于合成中间体的不同构型和潜在的催化作用，人们对合成虾青素直接人类消费的安全性存在着担忧，这些担忧使得雨生红球藻产生的虾青素成为高端市场的首选。另外，在美国、日本和一些欧洲国家，雨生红球藻已经被批准为鲑鱼饲料中的颜色添加剂，来补充人类消费的膳食补充成分。虽然天然虾青素应用广泛且需求量大，但是虾青素生产中却存在着生产成本高、产量低、提取困难等问题。

发明内容

针对上述现有技术存在的问题及不足，本发明提供一种2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的新用途即2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚在提高雨生红球藻细胞中虾青素含量中的应用，将2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚应用在提高雨生红球藻中虾青素含量中，该方法具有简单易行，低投入、高产出，并能有效提高虾青素的产量，进而增加雨生红球藻中虾青素的产率。

2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚在提高雨生红球藻细胞中虾青素含量中的应用方法，具体步骤如下：

（1）在光强2500~2800 lux、温度24~26℃条件下，持续培养雨生红球藻细胞至细胞浓度为 1×10⁶~ 1.5×10⁶个/mL时，加入不含氮源的BBM培养基，稀释雨生红球藻细胞至2×10⁵~3×10⁵个/mL，即得雨生红球藻藻液；

（2）采用无水乙醇配制的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚母液，在步骤（1）的雨生红球藻藻液加入2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚母液得到诱导雨生红球藻藻液，然后置于温度为27~29℃、光强为11000~12000 lux条件下进行光照培养；

（3）测定雨生红球藻细胞中虾青素含量；