[发明专利]一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法在审
| 申请号： | 201810339119.X | 申请日： | 2018-04-16 |
| 公开（公告）号： | CN108531428A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 邵辉;李彪 | 申请（专利权）人： | 中科国思生物科技研究（广州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N3/00;C12N15/01;C12N1/02;C05F11/08 |
| 代理公司： | 广州京诺知识产权代理有限公司 44407 | 代理人： | 刘菊欣 |
| 地址： | 510000 广东省广州市南沙区丰泽东路106号*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 速生 弗兰克氏菌 菌粉 活性炭 孢子 制备 菌丝 菌体培养 菌体 菌液 菌种 大规模工业化生产 真空冷冻干燥 发酵培养 发酵原料 基因诱变 接种效果 菌种接种 液体分离 孢子吸附 纯菌种 发酵罐 无菌水 冻干 无菌 吸附 洗脱 分化 生长 | ||
1.一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.选育弗兰克氏菌种：选取放线菌结瘤植物的根部根瘤，通过菌种选育方法进行处理培养，最终筛选得到弗兰克氏菌的纯菌种；
S2.将步骤S1得到的弗兰克氏菌的纯菌种通过基因诱变方法进行处理，得到速生弗兰克氏菌种；
S3.将步骤S2得到的速生弗兰克氏菌种接种到发酵罐里灭过菌的发酵原料中，形成菌体培养料，设置发酵罐温度为28～32℃，对菌体培养料进行5～7天的发酵培养，形成菌丝；
S4.将步骤S3得到的菌丝进一步分化出孢子，用无菌水进行洗脱，得到菌液，在菌液中加入无菌活性炭用于吸附孢子，待孢子吸附完成后，将含有孢子的活性炭与液体分离，得到以活性炭为载体的菌体；
S5.将步骤S4得到的菌体通过真空冷冻干燥法进行冻干处理，获得菌粉。
2.根据权利要求1所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述菌体培养料由以下重量比的成分组成：玉米淀粉50-70份、蛋白胨10-50份、酵母浸膏5-10份、磷酸二氢钾1-3份、磷酸氢二钾3-6份、硫酸镁1-4份、氯化钾1-3份、1％的柠檬酸铁1-10份、微量元素液1-10份，速生弗兰克氏菌种0.1-0.5份，无菌活性炭5-10份。
3.根据权利要求1所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述菌体培养料由以下重量比的成分组成：豆粕40-60份、麦麸20-40份、氯化钾1-10份、磷酸二氢钾1-3份、磷酸氢二钾3-6份、硫酸镁1-4份，速生弗兰克氏菌种0.1-0.5份，无菌活性炭10-20份。
4.根据权利要求1所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述菌种选育方法包括根瘤切片法、摇床培养法、酶处理法或蔗糖密度梯度离心法。
5.根据权利要求1所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，所述基因诱变方法包括紫外线-氯化钾-硫酸二乙酯复合诱变方法或紫外线-失重环境复合诱变方法。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，所述放线菌结瘤植物的根部根瘤采用在6～8月份时间采集的2年生的沙棘根部根瘤。
7.根据权利要求6所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的制备方法制备的一种速生弗兰克氏菌菌粉，其特征在于：所述速生弗兰克氏菌菌粉作为生物肥料添加剂使用。
8.根据权利要求1所述的一种速生弗兰克氏菌菌粉的应用。
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