[发明专利]一种固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法

权利要求书

1.一种用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：整个过程在纯水体系中完成，不使用除酒精以外的任何有机溶剂，包括如下步骤：

（1）固定化酶的制备：

将磷脂酶D酶液通过大孔吸附树脂柱进行吸附，其中，吸附方式为底部逆流连续进料，进料温度为10℃-20℃，吸附饱和后用去离子水冲洗树脂，洗去残留的磷脂酶D，所述大孔吸附树脂选自LX-1000，XAD761、SP207或ESR1中的一种；

（2）磷脂乳化液的制备：

将卵磷脂和去离子水混合，高速剪切，制备成均一乳化液，其中，所述卵磷脂和去离子的质量比例为1:30-1:50，所述卵磷脂来源为大豆、葵花籽、蛋黄或南极磷虾，所述卵磷脂来源中的磷脂酰胆碱含量为10%-30%；

（3）磷脂酸粗品的酶催化制备：

将上述磷脂乳化液连续通过装有固定化磷脂酶D的层析柱进行催化制备，收集流出液，即得磷脂酸粗品溶液；

（4）磷脂酸的除杂纯化：

将上述磷脂酸粗品溶液通过连续离子交换树脂，除去胆碱和杂质，收集最后流出液，即得磷脂酸纯化液；

（5）磷脂酸的浓缩干燥：

将上述磷脂酸纯化液浓缩、干燥，得磷脂酸产品；其中，所述浓缩方法为膜浓缩，截留分子量为400Dalton-3000Dalton的超滤或者纳滤膜进行浓缩，所述干燥方法为真空干燥或者冷冻干燥；

所述制备磷脂酸的方法中，采用的原料磷脂胆碱含量低于30%，磷脂酸产品含量达50%以上。

2.根据权利要求1所述的用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂为SP207。

3.根据权利要求1所述的用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：所述步骤（3）的磷脂乳化液采用底部逆流连续进料方式通过装有固定化磷脂酶D的层析柱，进料温度为40℃～50℃，进料流速为5BV/h～10BV/h。

4.根据权利要求1所述的用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：所述步骤（4）中磷脂酸的除杂纯化过程中，先经过强酸性阳离子交换树脂吸附胆碱，再经过弱碱性阴离子交换树脂中和氢离子。

5.根据权利要求4所述的用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：所述强酸性阳离子交换树脂选自001-7 732、D001、HD-8或NKC-9中的一种；所述弱碱性阴离子交换树脂选自LX-300C、D900、D301或D315中的一种。

6.根据权利要求5所述的用固定化磷脂酶D连续催化制备磷脂酸的方法，其特征在于：所述强酸性阳离子交换树脂为001-7 732，所述弱碱性阴离子交换树脂为LX-300C。