[发明专利]一种结核病疫苗及其制备工艺

说明书

本发明公开了一种结核病疫苗及其制备工艺，包括重组慢病毒表达质粒pLenti‑spHIL47/pLenti‑spHII1和包装有该重组慢病毒表达质粒的慢病毒。可显著提高巨噬细胞提呈结核分枝杆菌抗原的能力，增强疫苗刺激机体产生抗原特异性免疫应答的功能；能够有效地活化受结核分枝杆菌感染的巨噬细胞，提高巨噬细胞的自噬水平，促进巨噬细胞杀伤和清除结核分枝杆菌的功能；本发明可有效地促进机体清除体内感染的结核分枝杆菌；本发明与结核病化疗药物联用可显著地缩短结核病治疗的周期；本发明与结核病化疗药物联用可显著地延缓结核病治疗后的复发；与其他慢病毒载体疫苗比较，本发明具有良好的巨噬细胞靶向性和使用的安全性。

技术领域

本发明属于及基因工程领域和新型结核疫苗技术领域，具体涉及一种结核病疫苗及其制备工艺。

背景技术

结核病(TB)是一个全球性健康问题，每年产生8百万新的病例和2百万例死亡。多药和全药抗性TB菌株的出现仅使得此问题更加严重。Mtb的生命周期具有3个阶段。在初始感染之后的急性期，细菌在宿主中复制并且表达早期分泌蛋白，诱导宿主产生免疫反应。随着免疫反应开始控制感染，Mtb进入潜伏性无症状状态，其中细菌变成非复制型，主要寄生于巨噬细胞内并包裹于肉芽肿中。在受感染个体中细菌可以此潜伏状态持续多年，从而使得疾病的诊断和治疗困难。在一些情况下，细菌被再活化并且再次开始复制，从而回到疾病状态。再活化可因许多原因而发生，所述原因包括由诸如HIV等疾病、诸如化学治疗等治疗或免疫系统因老化而变弱而引起的免疫抑制。在世界范围内，估计20亿人潜伏性地感染Mtb，并且潜伏性Mtb的再活化是活性TB疾病中大多数新病例的原因。再活化与肺部炎症、坏死以及空化(一个使得病变引流进入支气管的过程)有关。当具有支气管病变的个体咳嗽时所产生的气溶胶使得Mtb有机体散播至未感染的易感人员，并且因此维持散播周期。

结核病的治疗目前主要依赖化学药物治疗，其存在的一个普遍性问题是治疗周期很长，即使是敏感性细菌造成的感染治疗周期至少也要6个月，对于耐药结核病的治疗周期就更长。过长的治疗周期使得患者治疗的依从性不差，往往会导致不规范的治疗，从而造成耐药菌的产生与流行。另一方面，耐多药结核病的出现使得结核病传统的化学治疗面临巨大的障碍，部分广泛耐药结核甚至面临无药可医的困境。因此，包括治疗性疫苗在内的免疫辅助治疗被看作是改善结核病治疗效果的有效途径之一。

目前，现有技术中的结核病疫苗均是主要通过活化淋巴细胞发挥抗结核功效，但结核菌在体内主要寄生于巨噬细胞中，虽然淋巴细胞被认为是结核病免疫的主要效应细胞，但仍需要通过巨噬细胞起作用，而大量研究证实结核菌可通过一系列机制抑制巨噬细胞的功能，包括对外界刺激的敏感性，因此存在即使淋巴细胞获得较好的活化，但仍难以清除巨噬细胞内结核菌的问题。

已有的结核病化疗药物对活化感染的敏感型结核分枝杆菌具有很好的杀伤和清除效果，其面临的主要问题在于对潜伏感染菌杀伤效果差，从而导致目前结核病治疗疗程过长的困境。而目前大部分结核病疫苗采用的刺激抗原是结核分枝杆菌早期分泌的免疫优势抗原，虽然可激发很强的免疫应答反应，但不能识别处于潜伏感染状态的结核分枝杆菌，因此同样不能杀伤和清除潜伏感染状态的结核分枝杆菌，对临床的帮助不大。

近年也有少量采用潜伏感染期特异性抗原进行疫苗设计的报道，但由于存在：(1)同样是以活化特异性淋巴细胞为主，无法对巨噬细胞内潜伏的结核菌进行杀伤和清除；(2)由于结核分枝杆菌能抑制巨噬细胞的功能，导致疫苗抗原提呈给淋巴细胞的效率较差，难以获得理想的刺激特异性淋巴细胞活化的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种结核病疫苗及其制备工艺，可显著提高巨噬细胞提呈结核分枝杆菌抗原的能力，增强疫苗刺激机体产生抗原特异性免疫应答的功能，同时能有效地活化巨噬细胞，增强巨噬细胞对胞内结核分枝杆菌的杀伤和清除能力。本发明公开了一种结核病疫苗，包括重组慢病毒表达质粒pLenti-spHL47/pLenti-spHI1和包装有该重组慢病毒表达质粒的慢病毒。