[发明专利]一种多糖及用作BCAT1基因沉默剂治疗肺癌的用途

说明书

本发明公开了一种多糖及用作BCAT1基因沉默剂治疗肺癌的用途。本发明公开了一种多糖及用作BCAT1基因沉默剂治疗肺癌的用途。该多糖通过如下步骤制备而成：步骤S1，草果粉碎，水提、脱蛋白、醇沉得草果粗多糖；步骤S2，草果粗多糖溶上样于DEAE‑52纤维素柱，蒸馏水、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mol/L NaCl溶液梯度洗脱，收集0.9mol/L NaCl溶液洗脱液，透析、浓缩干燥；步骤S3，将Sephacryl S400型凝胶填料纯水浸泡过夜充分溶胀后装柱，配置0.9mol/L NaCl溶液洗脱物溶液上样；以0.1mol/L碳酸氢铵溶液为洗脱液，流速为0.3mL/min，每6mL收集一管；以硫酸‑苯酚法追踪检测多糖的流出，以管数为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制多糖的出峰图谱，根据图谱合并目标色谱峰对应的流份，浓缩干燥得到精制多糖E。

技术领域

本发明属于生物领域，涉及多糖的制备和应用，具体涉及一种多糖及用作BCAT1基因沉默剂治疗肺癌的用途。

背景技术

细胞的增殖需要获得氨基酸来合成蛋白质或者以此作为氮源合成核苷酸和非必需氨基酸。研究表明非小细胞肺癌相较于正常组织更多依赖于支链氨基酸获得氮源。支链氨基酸转氨酶1(BCAT1)是支链氨基酸代谢的启动因素，也是三羧酸循环和氧化磷酸化的重要调节因子，其对于细胞的生长和能量生成至关重要。

研究显示沉默BCAT1降低细胞的氧摄入量并影响糖酵解途径，减少细胞能量的产生。越来越多证据表明BCAT1对于多种组织来源的肿瘤细胞的生长、迁移及侵袭起着重要作用。在非小细胞肺癌中，BCAT1的表达比周围正常组织明显增高且沉默BCAT1可明显降低肿瘤形成能力(文献:Ovarian Cancer Treatment by Suicide Gene Therapy:BeautyofNanotechnology in Medicine.Nano Research,2016)。在肺癌中，沉默BCAT1可以抑制A549肺癌细胞的迁移和侵袭能力，虽然对其增殖能力没有影响(文献:沉默BCAT1对肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响，现代生物医学进展，2017年17卷34期)。

草果为姜科植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire的干燥成熟果实，秋季果实成熟时采收，除去杂质，晒干或低温干燥(文献:中国药典2015版1部239页)。草果具有燥湿温中、截虐除痰的功效，用于寒湿内阻、痞满呕吐、疟疾寒热、瘟疫发热等证。在民间，草果主要用于疟疾、咽喉感染、腹痛、胃功能失调、消化不良、恶心呕吐和腹泻等。

草果含有较高含量的多糖，但是现有技术没有记载草果多糖在肿瘤治疗方面的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种多糖及用作BCAT1基因沉默剂治疗肺癌的用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的:

一种精制多糖E，通过如下步骤制备而成：

步骤S1，草果粗多糖的提取：将草果粉碎，先用超声提取，再用沸水回流提取，冷却，离心，取上清液浓缩，Sevag法脱蛋白，加入无水乙醇，静置过夜，再经离心后取沉淀，用无水乙醇洗涤，冷冻干燥即得草果粗多糖；

步骤S2，氯化钠分级洗脱物的制备：将DEAE-52纤维素填料装入层析柱平衡，配置草果粗多糖溶液上样；依次采用蒸馏水、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mol/LNaCl溶液进行梯度洗脱，分别洗脱15个柱体积；0.9mol/LNaCl溶液收集为一个组分，注入透析袋进行透析，以蒸馏水作为外部渗透液，透析去除氯离子；将0.9mol/LNaCl溶液洗脱物浓缩干燥；