[发明专利]一种利用特定扩增引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法

说明书

本发明公开了一种利用特定引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法，所述特定引物组由一条正向引物MS700F和两条反向引物M800R、MS400R组成，所述正向引物MS700F的碱基序列如SEQ NO.1所示，所述反向引物M800R及所述反向引物MS400R碱基序列分别如SEQ NO.2和SEQ NO.3所示，利用特定引物组PCR扩增鸢乌贼中型群和微型群的基因组DNA并电泳检测，电泳谱图显示：鸢乌贼微型群的PCR扩增产物仅在近400bp处出现一条特异亮带，鸢乌贼中型群的PCR扩增产物在近400bp和近800bp处各出现一条特异亮带，从而准确、快捷的区分两种鸢乌贼。

技术领域

本发明涉及分子标记鉴别领域，具体涉及一种利用特定扩增引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法。

背景技术

鸢乌贼（Sthenoteuthisoualaniensis）俗称红鱿鱼，隶属枪形目（Teuthoidea）、柔鱼科（Ommastrephidae）、鸢乌贼属（Sthenoteuthis），体表具小型近圆形色素斑，胴背，头部及触腕中央呈紫褐色，胴背前方皮下具卵圆形发光组织，雄性左侧第4腕茎化。鸢乌贼属于暖水性的大洋性种类，广泛分布于印度洋、太平洋的热带和亚热带海域，其中在南海和印度洋西北部海域鸢乌贼数量最为丰富，是我国南海大洋性渔业资源中最具开发潜力的种类。南海鸢乌贼根据形态特征可分为两种表型群，中型群和微型群。微型种群早熟且无背发光器，胴长范围9.8～12cm；中型种群具背发光器，胴长范围12～24cm。但幼体阶段的中型群与微型群外部形态相似，难以通过外部形态进行区分。

分子遗传标记可快速、高效和灵敏地检测出基因组DNA的多态性，是当前用于分析水产生物种质鉴别与群体遗传特性的主要标记。利用电泳图谱分析技术，以条带的扩增情况来反映物种的特异遗传信息，操作方法简单、结果分析方便。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种利用特定扩增引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法，本案由此产生。

发明内容

针对无法通过外部形态区分幼体阶段的中型群与微型群，本发明的目的在于提供一种特定扩增引物组并利用该特定引物组通过PCR扩增途径鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种利用特定引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法，所述特定引物组由一条正向引物MS700F和两条反向引物M800R、MS400R组成，所述正向引物MS700F的碱基序列如SEQ NO.1所示，所述反向引物M800R及所述反向引物MS400R碱基序列分别如SEQ NO.2和SEQNO.3所示。

一种利用特定引物组鉴别鸢乌贼中型群和微型群的方法，包括以下步骤：（1）利用鸢乌贼中型群或微型群制备样本DNA；（2）对包含有样本DNA和特定引物组的PCR扩增体系进行PCR扩增；（3）电泳检测PCR扩增后的扩增产物，利用凝胶成像系统拍照、记录，对电泳结果判定。

优选地，通过以下方法判定电泳结果：PCR扩增产物只在近400bp处出现一条特异亮带的为鸢乌贼微型群，PCR扩增产物分别在近400bp和近800bp处各出现一条特异亮带的为鸢乌贼中型群。

优选地，所述PCR扩增体系：扩增反应总体积为30μl，包括：3μL 10×buffer（Mg²⁺plus），dNTP Mixture各 2.5 mM，引物各0.5μM，0.5 U Taq酶(TaKaRa)和3μL模板DNA。

优选地，所述PCR扩增的反应条件为：95℃预变性1 min,94℃变性40s, 48℃退火40 s, 72℃延伸1 min，共35个循环；72℃ 3 min充分延伸4℃结束。

优选地，所述电泳的检测条件为：琼脂糖凝胶的质量浓度为2%、电泳电压120V、电泳时间30 min。