[发明专利]TCC在菌落总数测定中防止菌落弥漫生长的用途

说明书

本发明提供TCC在菌落总数测定中具有防止菌落弥漫生长的用途，方法：取适宜稀释度的蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，添加0.01％、0.05％、0.08％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.8％、1.0％TTC水溶液平板计数琼脂，同时以不添加TTC的计数琼脂作为对照，观察细菌的生长状况。菌落总数测定中，如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的芽孢杆菌菌落时，可在琼脂中加入0.2％～0.3％的TTC浓度，防止菌落出现弥漫现象而导致无法计数的情况发生。

技术领域

本发明属于菌落总数测定领域，特别涉及一种在菌落总数测定中防止芽孢杆菌弥漫生长的方法。

背景技术

菌落总数作为食品微生物学检验的基础检验项目，有着重要的意义，它用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。如今，食品种类众多，生产原料品种广，加工工艺复杂，特别是糕点、面点等含高淀粉类食品受芽孢杆菌污染的机率大，加工过程中难以彻底灭菌，菌落计数时琼脂平板上就会出现菌落弥漫生长的现象，导致菌落难以计数，对菌落总数检验项目的准确性造成严重的干扰。

目前，在测定食品菌落总数时，琼脂培养基表面往往会出现菌落弥漫生长的现象，对菌落计数造成一定的影响。依据GB 4789.2-2016《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》中，如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL)，凝固后翻转平板，按要求条件进行培养。但该方法防止菌落弥漫生长的效果不佳。

发明内容

为寻求更有效的方法，便于菌落观察和计数，本发明人通过研究发现TCC在菌落总数测定中具有防止菌落弥漫生长的用途。所述菌落为芽孢杆菌。

作为优选，所述TCC的浓度为0.2％～0.3％；在本发明中，所述“浓度”为“质量分数”。

作为优选，所述菌落总数测定中使用琼脂培养基。

在本发明提供的一个具体实施方式中，本发明的发明人以蜡样芽胞杆菌为芽孢杆菌代表，以大肠埃希氏菌为革兰氏阴性菌代表，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌代表，采用琼脂中加入TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)的方法抑制芽孢杆菌菌落弥漫生长现象，并与覆盖法的效果作对比；结果发现TTC浓度为0.2％～0.3％时，能有效防止蜡样芽胞杆菌在计数琼脂上出现菌落弥漫生长，同时对其和其他细菌的生长无显著影响，而覆盖法抑制菌落弥漫生长效果欠佳。因此，食品微生物检验中测定菌落总数时，遇到易受芽孢杆菌污染的食品，可在琼脂中加入0.2％～0.3％的TTC防止菌落出现弥漫现象而导致无法计数的情况发生。

在本发明提供的一个具体的应用实施例中，所述菌落总数测定方法依据GB4789.2-2016《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》，且TCC在菌落总数测定中防止菌落弥漫生长的具体方法为：将食品样品进行稀释后，将平板计数琼脂灭菌后，加入灭菌的0.2％～0.3％TTC溶液，使其混合均匀。

需氧细菌的新陈代谢作用能将T T C还原为红色的三苯甲臢(T P F)，使得菌落呈红色，故可以将T T C作为细菌生长的指示剂，同时TTC对细菌的生长有一定的抑制作用，本发明的发明人利用TTC，经过创造性的路径寻找了抑制菌落弥漫生长的有效方法，便于菌落计数。

附图说明

图1为不同浓度TTC琼脂对蜡样芽胞杆菌菌落形态的影响效果示意图。

具体实施方式

实施例1 TTC抑制菌落弥漫生长实验

1材料与方法

1.1材料