[发明专利]适用于家蚕表达的改造血小板衍生生长因子基因及其表达载体和应用

权利要求书

1.适用于家蚕表达的改造血小板衍生生长因子基因，其特征在于：所述改造血小板衍生生长因子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1第7~336位所示。

2.含有权利要求1所述适用于家蚕表达的改造血小板衍生生长因子基因的表达载体。

3.根据权利要求2所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体依次含有增强子hr3，分泌型丝胶1基因启动子、5`端非翻译区、信号肽、改造血小板衍生生长因子基因和丝胶1基因的终止子。

4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体还含有荧光筛选标记基因表达框，所述荧光筛选标记基因表达框位于所述增强子hr3上游。

5.根据权利要求2或3所述的表达载体，其特征在于：所述表达载体由SEQ ID NO.1所示序列连入SEQ ID NO.3所示序列的BamHI和NotI酶切位点处，再用AscI酶切后连入经相同酶切的pBac[3xp3-EGFP,af]载体中。

6.权利要求3~5任一项所述表达载体在家蚕丝腺表达重组血小板衍生生长因子中的应用。

7.利用权利要求3~5任一项所述表达载体表达重组血小板衍生生长因子的方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述表达载体注射已解除滞育的家蚕蚕卵，用无毒胶水封口后经甲醛蒸汽消毒，孵化，至成虫后进行自交或回交制种，筛选转基因阳性蛾圈，取阳性转基因家蚕茧壳，粉碎成粉末，然后溶解于含8M Urea、50mM Tris-Cl、pH 8.0的缓冲液中，80℃水浴30min，离心收集上清，经纯化，得重组血小板衍生生长因子。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：茧壳粉末溶解于缓冲液中茧壳粉末的浓度为30mg/mL。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述纯化的具体方法为：将上清液过0.45uM滤膜后，用肝素亲和柱HiTrap^TM Heparin HP过柱，用含0~1000mM NaCl的洗脱液洗脱，洗脱液再过阳离子交换柱HiTrap^TM SP HP，并用含0~1000mM NaCl的洗脱液洗脱，最后再过阴离子交换柱HiTrap^TM Q HP，收集流穿液，即为纯化后的重组血小板衍生生长因子。