[发明专利]运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法

权利要求书

1.运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征是包括如下步骤：

一、选取基因组已知大小的鱼类作为标准对照；将所述标准对照及待测鲟鱼分别进行如下操作：

1)、尾静脉取血；

2)、将步骤1)所得血液离心，用PBS缓冲液洗涤，最后加入PBS缓冲液至原血液原体积，得红细胞悬液Ⅰ；

3)、将50μl的红细胞悬液Ⅰ加入至1±0.01ml的2％多聚甲醛溶液中，混匀，4±1℃放置10～14小时；

4)、去除步骤3)所得物的上清，将沉淀用PBS缓冲液洗涤，最后加0.5±0.01ml的PBS缓冲液，得红细胞悬液Ⅱ；

5)、在红细胞悬液Ⅱ加入透化剂，所述透化剂由10μl Triton X-100和20μg Rnase A组成，于室温下透化处理30±5min；

6)、将步骤5)所得的透化处理所得物用PBS缓冲液洗涤，最后加0.5±0.01ml的PBS缓冲液，得红细胞悬液Ⅲ；

7)、将红细胞悬液Ⅲ进行PI染色；

8)、用流式细胞仪进行检测，分别得标准对照的荧光强度峰值P₂及待测鲟鱼的荧光强度峰值P₁；

二、按照N₁＝N₂×P₁/P₂，获得待测鲟鱼的基因组大小；

式中N₁表示待测鲟鱼基因组大小，N₂表示标准对照的基因组大小。

2.根据权利要求1所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于所述步骤7)为：取步骤6)所得的红细胞悬液Ⅲ150ul加入30μl PI，避光染色30±5min。

3.根据权利要求1或2所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于：所述步骤8)中流式细胞仪需具备488nm波长。

4.根据权利要求1或2所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于：所述步骤2)中的离心为1500±300rpm转速离心5±1min。

5.根据权利要求1或2所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于：所述2％多聚甲醛以0.2mol/L,PH7.4的PBS缓冲液为溶剂。

6.根据权利要求1或2所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于：所述PBS缓冲液为0.2mol/L，PH7.4的PBS缓冲液。

7.根据权利要求1或2所述的运用流式细胞技术快速测定鲟鱼基因组大小的方法，其特征在于：以草鱼作为标准对照。