[发明专利]基于特异性序列的维氏气单胞菌检测引物、试剂盒、检测方法及其开发方法

说明书

本发明涉及用于检测维氏气单胞菌的引物对，所述引物对的正向引物的核苷酸序列选自SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.3，所述引物对的反向引物的核苷酸序列选自SEQ ID NO.2和/或SEQ ID NO.4。本发明还涉及包含所述引物对或引物对组合的试剂、试剂盒及其在检测维氏气单胞菌中的应用。本发明还涉及开发用于检测维氏气单胞菌的引物的方法。

技术领域

本发明涉及一种基于特异性序列的维氏气单胞菌的检测引物、包含该引物的试剂、试剂盒、维氏气单胞菌的检测方法以及开发维氏气单胞菌的检测引物的方法，属于分子生物学领域。

背景技术

维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)又被称为维罗纳气单胞菌、维隆气单胞菌、凡隆气单胞菌，是一种革兰氏阴性杆状细菌，属无芽孢兼性厌氧型。该菌散在分布，普遍存在于淡水、污水、土壤乃至海水中，两端钝圆，大小约为0.3-0.7μm×1.2-2.5μm，具鞭毛，能运动(Kirov SM,Tassell BC,Semmler AB,O'Donovan LA,Rabaan AA等.“Lateral flagellaand swarming motility in Aeromonas species”[J].J Bacteriol.2002,184(2):547-555)。

维氏气单胞菌属于强毒病原菌，致病过程主要包括黏附-侵袭-宿主体内定殖以及毒素分泌等过程，期间产生一系列毒力因子，如气溶素(aerolysin)、肠毒素(enterotoxin)和粘附因子(adherence factor)等，这些毒力因子在水产动物、人类甚至畜禽感染中起着举足轻重的作用(袁旦一,汪开毓,陈德芳,黄凌远,王均等.“维氏气单胞菌在人工感染斑点叉尾鮰体内的组织定位和动态分布研究”[C].中国南方渔业论坛暨第二十九次学术会议论文集.广西北海,2013)。

该菌侵染宿主范围十分广泛。首先，该菌是已知最古老的鱼类病原菌之一，感染多种淡水鱼类、海水鱼类等，给水产养殖鱼类以及野生鱼类带来了严重威胁(Bossi-KüpferM,Genini A,Peduzzi R,Demarta A.“Tracheobronchitis caused by Aeromonas veroniibiovar sobria after near-drowning”[J].J Med Microbiol.2007,56(Pt 11):1563-1564)。例如，草鱼感染维氏气单胞菌时局部出血、有腹水、脾脏肿大等症状(王浩,权可艳,徐丽娟,李梦影,吕利群.“恩诺沙星控制草鱼维氏气单胞菌的用药方案”[J].淡水渔业,2013,43(2):47-53)。

同时，维氏气单胞菌还可以感染节肢动物和爬行类动物，如中华绒螯蟹(房海,陈翠珍,张晓君,巩元芳,葛幕湘.“中华绒螯蟹病原维氏气单胞菌的检验”[J].中国人兽共患病学报.2008,24(1):45-49)、中华鳖(钱明明.“中华鳖群体死亡症病原菌的分离鉴定及其预防的研究”[D].河北师范大学.硕士论文,2010)等。此外，该菌也能导致小鼠和正常人及免疫功能低下人群感染性并发症，引起包括关节炎、伤口感染、肠胃炎、菌血症、脑膜炎和心内膜炎等在内的多种感染病症(Lye DJ.“Gastrointestinal colonization rates forhuman clinical isolates of Aeromonas veronii using a mouse model”[J].CurrMicrobiol.2011,63(4):332-336)。

近年来，日益增多的病例表明，维氏气单胞菌已成为一种重要的人-鱼共患致病菌，其分布广泛，致病性较强，并在食品安全方面占据举足轻重的地位，部分国家已经将其规定为食品安全的检疫对象(吴同垒,单晓枫,孟庆峰,郭伟生,王伟利,钱爱东等.“维氏气单胞菌研究进展”[J].中国兽药杂志,2011(07):41-44)。