[发明专利]一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法

说明书

本发明涉及一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法，其特征在于采用以下步骤：A、取新鲜的猪动脉血管，清净、沥干、绞碎；B、按一定质量比依次在氢氧化钠水溶液、盐酸水溶液、乙醚中浸泡；C、使用蒸馏水反复洗涤、沥干后在乙酸水溶液浸泡3天，然后离心冷冻，得弹力蛋白粗品；D、将弹力蛋白粗品和去离子水混合后作为酶解底物，用NaOH调pH至8.0‑9.0，加入磷酸盐缓冲液，然后再加入弹力蛋白酶和基质金属蛋白酶，室温下采用超声辅助酶解，得初步酶解液；E、将所述初步酶解液，在红外线辐射下辅助酶解；灭酶后得酶解液；F、离心处理，取上清液，用超滤膜进行恒体积超滤，得超滤液；G、冷冻干燥，得弹力蛋白肽。本发明具有成本低、酶解效率高的优点。

技术领域

本发明属于生物化工技术领域，特别涉及一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法。

背景技术

弹力蛋白是一种结构巨大、高交叉度、复杂的、疏水性、水不溶性的蛋白，作为一种主要的细胞外基质蛋白，组成了弹性纤维的“芯”。现已发现弹力蛋白有两种形式：弹力蛋白I存在于韧带、主动脉和皮肤中，弹力蛋白II可从软骨中得到。弹力蛋白是肌肤组成的重要成分，在肌肤中仅含5%，却是激发肌肤胶原蛋白和弹性纤维生成的关键，胶原蛋白决定肌肤的柔润饱满，弹性纤维决定肌肤的紧致弹力。

弹力蛋白肽（elastin-derived peptides, EDPs）是弹力蛋白的降解产物。弹力蛋白的降解包括生物酶的降解和化学降解，前者一般称为弹力蛋白溶解，后者称为弹力蛋白肽的合成。弹力蛋白肽对纤维母细胞和单核细胞产生趋化作用，使弹性纤维与纤维母细胞的黏附力增强， 弹力蛋白肽可刺激Neu-1唾液酸酶的活性增强，Neu-1的活性增强可引起可溶性的弹力蛋白地释放，这些弹力蛋白聚集成团，或和微纤维成分相互作用，形成弹性纤维，因而可提高皮肤的弹力，对于预防、改善皱纹或松弛十分有效。

猪动脉血管来源丰富、廉价易得，含有丰富的弹力蛋白I，是获得弹力蛋白肽的优质且性价比较高的原料，但是现有技术中未见通过酶解反应方法以猪动脉血管为原料制备弹力蛋白肽的报道。目前制备弹力蛋白肽分为三种方法：化学方法、重组DNA合成、酶解弹力蛋白。通过化学方法合成的弹力蛋白肽成本一般较高，并且其副产物可能对人体有害，同时生产过程中会产生污染环境的排出物；通过重组DNA合成的弹力蛋白肽普遍为长肽，而弹力蛋白肽一般都是短肽，因此这种方法不适合制备弹力蛋白肽；酶解弹力蛋白制备弹力蛋白肽时，不仅降解所耗的时间短、操作简单安全、产品营养流失较少，而且不污染环境。

酶解反应在常规水浴中进行时，需要较长的反应时间；在酸、碱及有机溶剂等介质中进行时，易使酶蛋白变性失活，酶解效率降低。超声辅助酶解，由于热效应、机械效应、空化效应和化学效应等共同作用，细胞壁会产生位移和变形，出现纵向裂纹、吸水润胀、细纤维化等现象，这些物理变化能让酶在水解时，有效地提高其可及度，提高酶解效率。红外线辅助酶解，对反应体系进行升温并促进蛋白酶切位点的暴露，可有效增加酶切位点与酶的作用频率，从而提升酶解效率，继而显著提高蛋白水解度和肽的转化率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法，该方便具有成本低，酶解效率高的优点。

为解决上述技术问题，本发明提供以下技术方案，一种酶解猪动脉血管制备弹力蛋白肽的方法，其特征在于采用以下步骤：

A、取新鲜的猪动脉血管，清洗干净后，沥干，用绞肉机绞碎，得碎猪动脉血管；

B、按质量比1：20称取所述碎猪动脉血管和0.1mol·L^-1的氢氧化钠水溶液，所述碎猪动脉血管在所述氢氧化钠水溶液中浸泡24h，捞出后用蒸馏水洗至中性；然后用碎猪动脉血管质量20倍的0.6mol·L^-1的盐酸水溶液浸泡24h，然后用蒸馏水洗至中性；最后用碎猪动脉血管质量2倍的乙醚浸泡24h，捞出后再次使用碎猪动脉血管质量2倍的乙醚浸泡24h，得预处理的猪动脉血管；