[发明专利]木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法

说明书

本发明属于电泳法技术领域，公开了一种木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，所述木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法包括：木兰科植物叶过氧化物酶的预处理与提取；单向快速分离木兰科植物叶过氧化物酶；采用联苯胺法快速显色，显色完成后，选择EPSON扫描仪中的透射稿模式快速扫描染色后的凝胶。本发明采用酸性聚丙烯酰胺电泳分离木兰科植物过氧化物酶，改变传统聚丙烯酰胺电泳分离过氧化物酶分辨率不高、条带数少等缺点。对于木兰科植物的鉴定、品种选育以及亲缘关系研究具有很高的应用价值。

技术领域

本发明属于电泳法技术领域，尤其涉及一种木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：木兰科(Magnoliaceae)植物主要分布于亚洲、美洲热带亚热带地区，该科植物含2-17个属，种类240-300个种，主要分布于东南至西南部，向东北、西北逐步减少。木兰科植物是我国重要的观赏花木、传统中药及香精原料植物，在城市景观设计和经济作物栽培中广泛应用。因此建立快速的品种鉴定方法意义重大。目前，对于木兰科植物分类和鉴定研究中，通常以植物学形状特征和生化技术作为鉴定方法，但在实际应用中，木兰科各品种间植物学特征相似的情况很多，且此方法需要的周期长，对研究者的专业背景要求高，可行性不强。而利用与遗传相关的生理生化物质(如过氧化物酶、DNA等)进行品种鉴定是较为简单、准确、快速的方法，但其难点是对于相关物质的提取和高效分离。因此开发出快速高效分离这些生理生化物质的方法，对于品种鉴定意义重大。近年来，有学者对7属11种木兰科植物的过氧化物酶同工酶进行了分析，还有学者对河南省木兰属9种植物过氧化物酶同工酶进行了研究，并对其形态分类提出了不同观点；但上述研究都是采用常规的植物过氧化物酶同工酶分离体系(碱性电泳)，这一体系对多数木兰科植物过氧化物酶分辨率较低，不能完全呈现研究对象所包含的全部过氧化物酶条带信息，例如厚朴叶采用上述碱性电泳只能分离得到5条过氧化物酶同工酶谱带，而采用本发明的方法则可以分离得到17条同工酶谱带。很显然，碱性电泳方法所获得同工酶条带信息很少，不能完整呈现该物种过氧化物酶的全貌，基于这些有限信息所进行的后续分类、鉴定等研究很可能就是盲人摸象，得出的结论会因为信息的不完整出现偏差甚至错误。发明人通过对不同凝胶缓冲体系、电极缓冲液体系的比较研究，得出木兰科植物过氧化物酶同工酶分离的电泳方案。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有技术对木兰科植物过氧化物酶分离效果不理想，所得酶谱信息不全，不能比较完整地反映过氧化物酶位点信息的全貌。

解决上述技术问题的难度和意义：获得信息量丰富的木兰科植物过氧化物酶同工酶酶谱可以有效识别不同种植物中基因的存在和表达；为研究木兰科不同种植物生物遗传差异、推断亲缘关系提供有效线索；进一步，可以为木兰科植物良种选育、品种鉴定等提供有效手段。其主要难度在于根据木兰科植物过氧化物酶的生物化学性质，探索出一种不同于常规的电泳凝胶缓冲体系以及与该缓冲体系相匹配的电极缓冲液体系和电泳分离条件，从而能够比较全面呈现木兰科植物过氧化物酶的完整信息。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法。

本发明是这样实现的，一种木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法，所述木兰科植物过氧化物酶的酸性聚丙烯酰胺电泳分离方法包括：木兰科植物叶过氧化物酶的提取；单向快速分离木兰科植物叶过氧化物酶；采用联苯胺法快速显色，显色完成后，选择EPSON扫描仪中的透射稿模式快速扫描染色后的凝胶。

进一步，所述木兰科植物叶过氧化物酶的提取具体包括：将新鲜采摘的木兰科植物叶片，用自来水洗净后，再用超纯水漂洗三次；用干净的吸水纸或脱脂棉将水吸干；采用冰浴研磨的方法提取叶片中的过氧化物酶。该步骤目的在于通过低温研磨防止酶蛋白变性。