[发明专利]一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法

说明书

本发明公开了一种降低‑80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法。本发明发现蔓荆子二萜C、D、E或山藿香定可以通过抑制CIK细胞中hsa‑miR‑543的表达水平提高其在‑80℃冻存6月后对肿瘤细胞的杀伤力，冻存前经蔓荆子二萜C、D、E或山藿香定预处理可以将其于‑80℃冻存6月后对肿瘤细胞的杀伤力维持在冻存前的水平。因此，本发明提供的方法可以有效降低‑80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的不利影响。

技术领域

本发明属于细胞免疫领域，涉及一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法。

背景技术

-80℃冻存常用于对CIK细胞进行6个月内的短期保存。研究表明，-80℃冻存3个月可以基本保持CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性，但是从第4个月开始，复苏后的CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤力显著降低(参考文献：不同冻存时间对CIK细胞免疫表型及杀伤活性的影响，现代肿瘤医学，2016年05月第24卷第10期)。

上述缺陷影响了-80℃冻存对CIK细胞6个月短期保存的效果。

发明内容

本发明旨在克服现有技术不足，提供降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法。

本发明技术方案如下：

一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法，冻存前先用hsa-miR-543抑制剂预处理，所述hsa-miR-543抑制剂为蔓荆子二萜C。

一种-80℃冻存CIK细胞的方法：取培养中的CIK细胞，于冻存前一定时间在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜C，培养一定时间后，离心弃上清液，加入冻存液，调整细胞浓度至合适浓度，梯度降温至-80℃冻存。

优选地，于冻存前8h在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜C，培养8h后，离心弃上清液。

优选地，蔓荆子二萜C浓度为10μM。

优选地，冻存液由RPMI 1640培养基、自体血浆和二甲基亚砜按体积比5:4:1混合而成。

优选地，调整细胞浓度至2×10⁷/ml。

优选地，梯度降温方法为：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，转至-80℃低温冰箱放置。

一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法，冻存前先用hsa-miR-543抑制剂预处理，所述hsa-miR-543抑制剂为蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E。

一种-80℃冻存CIK细胞的方法：取培养中的CIK细胞，于冻存前一定时间在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E，培养一定时间后，离心弃上清液，加入冻存液，调整细胞浓度至合适浓度，梯度降温至-80℃冻存。

优选地，于冻存前8h在培养基中添加有效浓度的hsa-miR-543抑制剂蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E，培养8h后，离心弃上清液。

优选地，蔓荆子二萜D或蔓荆子二萜E浓度为10μM。

优选地，冻存液由RPMI 1640培养基、自体血浆和二甲基亚砜按体积比5:4:1混合而成。

优选地，调整细胞浓度至2×10⁷/ml。

优选地，梯度降温方法为：首先于4℃冰箱中放置1h，然后-20℃冰箱中放置2h，转至-80℃低温冰箱放置。

一种降低-80℃冻存对CIK细胞杀伤肿瘤活性的方法，冻存前先用hsa-miR-543抑制剂预处理，所述hsa-miR-543抑制剂为山藿香定。