[发明专利]特异性识别P53突变的基因系统

说明书

本申请公开了一种特异性识别P53突变的基因系统，包括至少一段核苷酸序列，所述核苷酸序列含有能被野生型P53蛋白特异结合的靶标序列。本发明的基因系统可以特异性识别并杀死P53缺陷细胞。

技术领域

本发明涉及领域生物技术领域，具体涉及一种DNA分子以及一种特异性识别P53突变的基因系统。

背景技术

P53作为一种重要的肿瘤抑制蛋白，在调节细胞正常活动和防止细胞癌变中发挥着核心作用。P53是人类基因组中突变频率最高的基因之一，在人类癌症中有一半以上的癌症细胞发现不同类型的P53突变或缺失，此种改变在肿瘤的形成过程中发挥着极其重要的作用。与正常细胞相比，肿瘤细胞通常缺乏野生型P53蛋白并具有突变型的P53蛋白^(1-3)。

CRISPR相关(CAS)系统是存在于某些细菌中用于清除外来的遗传物质的特殊系统。作为II型CRISPR系统中最具有特征性的成员，核酸酶Cas9可在单引导RNA(sgRNA)的引导下，广泛地运用于哺乳动物细胞中进行双链DNA切割以及基因敲除^(4-6)。

白喉毒素(DT)是一种由白喉棒状杆菌分泌的能使细胞死亡并引起“白喉”症状的致病蛋白质⁽⁷⁾。完整的DT是含有大量精氨酸的多肽链，通过蛋白酶的作用后可水解成A、B两个片段，片段A是白喉毒素的主要致病部分，具有酶活性，能使真核细胞中的延伸因子(EF-2)失活而阻碍细胞内蛋白质的合成，从而导致了细胞死亡，片段B能被对白喉毒素敏感的细胞的细胞膜上特定的表面受体所识别⁽⁸⁾。白喉毒素选择性地在肿瘤细胞内表达将发挥杀死细胞的作用，将是治疗肿瘤的一种新的有效策略。

参考文献：

1.Kandoth C,McLellan MD,Vandin F,Ye K,Niu B,Lu C,et al.Mutationallandscape and significance across 12major cancer types.Nature.2013；502(7471):333-9.

2.Hainaut P,Pfeifer GP.Somatic TP53Mutations in the Era of GenomeSequencing.Cold Spring Harbor perspectives in medicine.2016；6(11).

3.Vousden KH,Lu X.Live or let die:the cell's response to p53.Naturereviews Cancer.2002；2(8):594-604.

4.Mali P,Yang L,Esvelt KM,Aach J,Guell M,DiCarlo JE,et al.RNA-guidedhuman genome engineering via Cas9.Science(New York,NY).2013；339(6121):823-6.

5.Ran FA,Hsu PD,Wright J,Agarwala V,Scott DA,Zhang F.Genomeengineering using the CRISPR-Cas9 system.Nature protocols.2013；8(11):2281-308.

6.Farzadfard F,Perli SD,Lu TK.Tunable and multifunctional eukaryotictranscription factors based on CRISPR/Cas.ACS synthetic biology.2013；2(10):604-13.