[发明专利]一种快速鉴别转基因阳性株系的方法

说明书

本发明公开了一种快速鉴别转基因阳性株系的方法，包括以下步骤：(1)配制含有筛选抗生素和细胞分裂素6‑BA的混合溶液，所述筛选抗生素为待分析的转基因植株含有的抗性基因对应的抗生素；(2)将混合溶液移入到液体容器中；(3)剪取待分析的转基因植株叶片，将其浸泡到液体容器中；(4)将液体容器置于光照培养箱，28℃培养10天；(5)检验记录叶片变黄坏死情况；与现有技术相比，本发明可以实现对转基因苗的快速筛选，同时本发明具有高通量、操作简单、成本低廉、适用面广等特点，可以应用于玉米、水稻、大豆等转基因植物的筛选鉴定。

技术领域

本发明涉及一种快速鉴别转基因阳性株系的方法，属于转基因株系的鉴别领域。

背景技术

随着生物技术的发展，对生物的基因进行改造已经变得越来越普遍，这通常采用基因工程(DNA重组技术)的手段来完成的，通过在体外对遗传物质DNA进行改造，按照人们所设定的意愿整合，实现其最终性状和功能的变化，最后在外源“载体”的帮助下通过农杆菌侵染或基因枪(植物)或显微注射(动物)等方式将其重组到生物体内进行表达。这种采用遗传操作的手段获得的植物一般称为“基因工程植物或转基因植物”。自1983年世界上第一株转基因植物(转抗生素基因的烟草)问世以来，植物基因工程发生了跨越式的发展，到目前为止人们在超过60种植物上成功进行转基因，其中水稻、玉米、大豆、番茄等作物已经批准上市，这充分说明了转基因在未来作物改良中显示出巨大潜力。

植物转基因一般通过农杆菌介导的方法进行遗传转化，农杆菌所携带的T-DNA可随机插入到寄主细胞基因组，并最终产生转化细胞和非转化细胞，也就是遗传转化的后代有一部分是“假阳性”。这就需要采用一些鉴定方法来排除把这些假阳性转化植株，目前常用的鉴定方法有，Southern杂交、Northern杂交、Western杂交、Real-time PCR等方法，但是这些方法操作复杂、繁琐，并且需要专业化仪器设备，不适于大规模筛选转基因后代，因此需要寻找一种简便、快捷、高效的筛选方法，本发明直接采用转基因筛选标记基因，采用离体叶片进行筛选，具有简单高效的特点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种快速鉴别转基因阳性株系的方法，具有筛选快速，成本低廉，操作方便，适用面广等特点，以克服现有技术的不足。

本发明的技术方案是：一种快速鉴别转基因阳性株系的方法，包括以下步骤：

(1)配制含有筛选抗生素和细胞分裂素6-BA的混合溶液，所述筛选抗生素为待分析的转基因植株含有的抗性基因对应的抗生素；

(2)将混合溶液移入到液体容器中；

(3)剪取待分析的转基因植株叶片，将其浸泡到液体容器中；

(4)将液体容器置于光照培养箱，26℃～28℃培养10～12天；

(5)检验记录叶片变黄坏死情况，如果叶片保持绿色则为阳性株系。

所述液体容器为96孔板。

所述剪取的待分析转基因植株叶片为2.5-3.5cm。

所述混合溶液按筛选抗生素40～50ug/ml和细胞分裂素6-BA 1～2ug/ml比例配制。

所述筛选抗生素为潮霉素HPH、G418、博来霉素或庆大霉素。

本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明可以实现对转基因苗的快速筛选，同时本发明具有高通量、操作简单、成本低廉、适用面广等特点，可以应用于玉米、水稻、大豆等转基因植物的筛选鉴定。另外，筛选抗生素除了用潮霉素HPH外，还可以用G418等作为筛选抗生素，具有较高的应用前景。

附图说明

图1为潮霉素筛选1周后的水稻叶片，其中，+表示为潮霉素筛选阳性植株，―表示为阴性植株；