[发明专利]一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法

权利要求书

1.一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、联合采用超高效液相色谱/四级杆-飞行时间质谱联用UPLC-Q-TOF/MS和气相色谱-飞行时间质谱联用GC-TOF/MS分析，对非小细胞肺癌NSCLC组和正常对照组患者血清中的代谢物进行非靶标代谢组学分析，采用多变量统计方法，比较NSCLC组和正常对照组的代谢指纹图谱变化；S2、通过比较NSCLC和正常对照人群血清中的代谢物变化，对目标性差异代谢标志物进行代谢通路归属分析，联合临床NSCLC诊断指标，根据其诊断效能，确认磷脂酰胆碱PCs为NSCLC相关差异性代谢标志物；S3、采用UHPLC-Q-TOF/MS技术，建立NSCLC血清磷脂酰胆碱的定量检测方法，确认12个磷脂酰胆碱为NSCLC诊断生物标志物，其中饱和和单不饱和磷脂酰胆碱PC15:0/18:1、PC18:0/16:0和PC18:0/20:1的含量在NSCLC中显著增加P0.05，多不饱和磷脂酰胆碱PC17:2/2:0、PC 18:4/3:0，PC15:0/18:2，PC16:0/18:2、PC17:0/18:2，PC18:2/18:2、PC16:0/20:3，PC15:0/22:6和PC24:4/17:2的含量在NSCLC中显著降低P0.05；S4、分析单指标和多指标联合作用的诊断效能，确认该12个磷脂酰胆碱组合作为NSCLC血清诊断生物标志物。

2.如权利要求1所述的一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法，其特征在于：所述的步骤S1中对 血清中的代谢物进行的非靶标代谢组学分析包括非靶标UPLC-Q-TOF/MS检测和非靶标GC-TOF/MS检测。

3.如权利要求1所述的一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法，其特征在于：所述的步骤S1中的血清样本的代谢物还需要进行预处理，所述的预处理包括UPLC-Q-TOF/MS血清样本预处理和GC-TOF/MS血清样本预处理。

4.如权利要求3所述的一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法，其特征在于：UPLC-Q-TOF/MS血清样本预处理方法为：首先，将低温保存的血清样本置室温解冻摇匀，取200μL的样本加入700μL甲醇，再加入40μL L-2-氯苯丙氨酸，涡漩震荡30s；然后，超声10min，-20℃静置1h；4℃,13000r/min离心15min；最后，取400μL上清液，转入进样瓶中，进行UPLC-Q-TOF/MS检测分析。

5.如权利要求3所述的一种定量筛选NSCLC的诊断生物标志物的方法，其特征在于：所述的GC-TOF/MS血清样本预处理为：首先，将低温保存的血清样本置室温下解冻，取200μL样本于1.5mL EP管中，加入700μL甲醇，再加入40μL L-2-氯苯丙氨酸，涡漩震荡10s；然后，4℃,13000r/min离心15min；取出300μL上清液于2mL进样瓶中，在真空浓缩器中干燥提取物，向干燥后的代谢物加入40μL甲氧胺盐试剂，轻轻混匀后，放入烘箱中80℃孵30min；向每个样品中迅速加入60μL BSTFA,将混合物70℃孵育2h；最后，冷却至室温，向混样的样本中加入10μL FAMEs，混匀，进行GC-TOF/MS检测分析。