[发明专利]基因工程组织型纤溶酶原激活剂重组异构体（nt-PA）包涵体的复性方法在审
| 申请号： | 201810352669.5 | 申请日： | 2018-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN110387365A | 公开（公告）日： | 2019-10-29 |
| 发明（设计）人： | 姜国胜;谢志卿;徐文娟 | 申请（专利权）人： | 山东博创生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 264006 山东省烟*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 包涵体 组织型纤溶酶原激活剂 二硫键 异构体 大肠杆菌表达 复性体系 基因工程 新型工艺 折叠复性 产业化 复性率 变性 产率 错配 复性 应用 开发 | ||
1.一种组织型纤溶酶原激活剂重组异构体(nt-PA)包涵体的复性方法。其特征在于通过一种独特的变性、复性体系使nt-PA包涵体中大量错配的二硫键重新打开并形成正确的二硫键，提高nt-PA的复性率。
2.根据权利要求1所述一种组织型纤溶酶原激活剂重组异构体(nt-PA)包涵体的复性方法，其特征在于包括两种体系：变性体系和复性体系。
3.根据权利要求2所述nt-PA包涵体的变性体系，其特征在于包括：nt-PA包涵体、盐酸胍、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、二硫苏糖醇(DTT)，采用盐酸胍的浓度范围为3-8M，Tris的浓度范围为25-100mM，DTT的浓度范围为20-120mM。
4.根据权利要求2所述nt-PA包涵体的复性体系，其特征在于包括：变性nt-PA、二硫键异构酶(PDI)、Tris、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)，采用Tris的浓度范围为25-100mM，氧化型谷胱甘肽的浓度范围为2-12mM，还原型谷胱甘肽的浓度范围为0.1-2mM。
5.如权利要求4所述的nt-PA包涵体的复性体系，其特征在于PDI为重组人二硫键异构酶(rhPDI)或其它来源的PDI。
6.如权利要求4所述的nt-PA包涵体的复性体系，其特征在于PDI催化复性体系中，变性nt-PA与PDI的摩尔比为100:1-10:1，变性nt-PA的蛋白浓度为0.01～2mg/ml，其中最优的浓度为0.5mg/ml。
7.权利要求1-6任意一种组织型纤溶酶原激活剂重组异构体(nt-PA)包涵体的复性方法。
步骤：nt-PA工程菌表达→菌体破碎→包涵体分离→变性→PDI催化复性→脱盐→亲和层析→离子交换层析等步骤完成。
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