[发明专利]一种提高抗真菌活性物质HSAF发酵产量的方法

说明书

本发明提供一种提高抗真菌活性物质HSAF发酵产量的方法，通过在菌株发酵前期添加谷氨酸、精氨酸或其盐的一种，可使发酵液中目的产物HSAF的产量达到473.13‑572.95mg/L，比未添加氨基酸的对照组提高了18.14‑43.06％。本发明所述方法可以大幅提高HSAF的发酵产量，且简单易行，成本较低，比较适合大规模工业化生产。

技术领域

本发明属于发酵工程领域，具体涉及一种提高抗真菌活性物质HSAF发酵产量的方法。

背景技术

热稳定抗真菌因子(Heat Stable Aniifungal Factor，HSAF)是由一种新型的生防细菌Lysobacterenzymogenes分泌的次级代谢产物，其结构由一个独特的大环内酰胺体系、一个四胺酸结构单元和5,5,6-三环骨架组成(如下所示)，这一新颖结构不同于目前市场上任何一种杀菌剂。HSAF对多种真菌、部分细菌和线虫具有良好的拮抗效果，而且其抗真菌机制比较独特。研究表明HSAF的作用靶标是细胞膜上鞘脂类化合物的生物合成，从而影响真菌菌丝的极性生长。其只对丝状真菌有抑制效果，对哺乳动物和植物不起作用，这说明了HSAF安全性高，对人体基本无毒性，因此，HSAF可开发成良好的生物源农药用于生物防治。

在前期工作中，我们已对HSAF发酵的培养基成分及培养条件进行了系统地优化，使HSAF产量迅速提高到400.49mg/L。虽然取得了一定的成绩，然而与工业化生产仍有一定差距，因此有必要对其发酵产量进一步深入研究，从而满足大规模生产和市场的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高抗真菌活性物质HSAF发酵产量的方法，具体为在产酶溶杆菌(L.enzymogenes)OH11发酵过程中添加一种氨基酸或其盐。本发明所述方法可以大幅提高HSAF的发酵产量，且简单易行，成本较低，比较适合大规模工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种提高抗真菌活性物质HSAF发酵产量的方法，在菌株发酵前期添加单一的氨基酸或其盐进行发酵培养。

进一步的，本发明所述的氨基酸为谷氨酸或精氨酸，申请人发现，添加单一的谷氨酸或精氨酸可以显著提高HSAF的发酵产量。

进一步的，本发明单一的氨基酸或其盐与发酵液的质量体积浓度为1～9g/L，优选的，当选用谷氨酸时，谷氨酸或其盐与发酵液的质量体积浓度为2～4g/L，更优选为4g/L；当选用精氨酸时，精氨酸或其盐与发酵液的质量体积浓度为1～8g/L，更优选为5～6g/L，最优选为5g/L。

本发明氨基酸或其盐的添加时间需要在菌株发酵前期，优选的，在发酵时间的0～10h内，更优选为0～6h内，最优选为发酵6h时加入。

本发明氨基酸或其盐在加入之前，优选的将其配制成母液的形式，配制方法可以按照本领域的常规方法和浓度，确保最终添加量能够满足上述需求即可。本发明提供一种氨基酸或其盐母液的配制方法：称取1.1-11g氨基酸或其盐，用超纯水定容至50-100mL，并用酸碱调节pH至7.0。

优选的，菌株发酵条件为装液量20～24％，发酵温度25～27℃，发酵时间56～60h。

菌株发酵所用的培养基可以为常规发酵所用的基础发酵培养基。

本发明菌株在发酵之前可以按照本领域的常规方法进行活化和种子液的制备，种子液制备可以选用本领域常用的种子培养基，如LB液体培养基，优选方式为将活化好的菌株接入到LB液体培养基中，振荡培养。培养后的种子液转接到基础发酵培养基中进行发酵。优选的种子液培养条件为26～30℃、170～190rpm，12～15h，种子液OD₆₀₀＝1.0～2.0。种子液接入体积为基础培养基的1.0～1.5％。