[发明专利]一种动物肾脏多肽的提取方法

说明书

本发明公开了一种动物肾脏多肽的提取方法，将动物肾脏用含碳酸钠和戊酸乙酯的水溶液进行脱脂处理，然后采用复合蛋白酶酶解，酶解过程中加入抗坏血酸，得到的酶解液经超滤、凝胶柱层析，即得肾脏多肽。该提取方法简单可行，可以有效的将大分子蛋白质进行酶解，得到的酶解液中寡肽的含量低、多肽含量高，具有投入低、操作简单、蛋白质降解效果好、肾脏多肽得率高的优势。

技术领域

本发明涉及生物提取技术领域，特别涉及一种动物肾脏多肽的提取方法。

背景技术

活性肽又称功能肽，是蛋白质中包含的一些特殊的碎片序列，是对生物机体的生命活性有益或具有生理作用的肽类化合物，是蛋白质中20种天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，也是源于蛋白质的多功能化合物。从根本上对人的健康有积极的作用，经口服后能影响身体的主要系统—心血管系统、消化系统、免疫系统和神经系统。它是具有清除自由基、提高机体免疫能力、延缓衰老、降低血压等特殊功能的一类功能因子。近年来，随着生物技术的迅猛发展，许多蛋白质的一级结构陆续得到揭密，同时，生物技术在食品加工中的应用越来越广泛，大量具有生理功能的食品被发现，其中备受瞩目的是存在于自然界中大量具有调节生理和代谢功能的生物活性多肽的发现。这些肽在原蛋白质序列中并没有活性，当用体内肠道酶或体外酶作用蛋白质时，这些肽将从原来的序列中释放出来，并表现出特殊的活性。因此，在过去的几十年里，这些可减少慢性疾病的危害和促进天然免疫力保护并存在于食品蛋白中的肽的潜能唤起了人们极大的兴趣。目前，活性多肽的提取方法主要有直接提取法、化学法和酶法。直接提取法会不可避免地使用到有机溶剂，导致所提取的生物活性多肽中存在有机溶剂残留而带来毒性的问题，而且会对环境造成污染，此外，还提高了生产成本，因此，实际生产中不宜使用此方法。化学法是利用酸或碱水解蛋白，碱水解的产物会带有异味等问题，而使用酸水解会严重影响到氨基酸的结构，并能形成如氯丙醇等有毒物质，且反应条件较为剧烈，对生产设备要求较高，故较少采用。随着酶工程技术的发展，研究者逐渐注意到利用酶工程技术制备生物活性肽的可行性。因酶水解法成本较低，安全性高，能在温和的条件下进行定位水解产生特定的肽，且水解后的肽一般具有原蛋白质及游离氨基酸不可比拟的生理活性，现已成为蛋白制品发展的方向。而利用酶解技术从动物肾脏中提取活性多肽的报道较为少见。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取方法简单可行，可以有效的将大分子蛋白质进行酶解，得到的酶解液中寡肽的含量低、多肽含量高的一种动物肾脏多肽的提取方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种动物肾脏多肽的提取方法，将动物肾脏用含碳酸钠和戊酸乙酯的水溶液进行脱脂处理，然后采用复合蛋白酶酶解，酶解过程中加入抗坏血酸，得到的酶解液经超滤、凝胶柱层析，即得肾脏多肽。该提取方法简单可行，可以有效的将大分子蛋白质进行酶解，得到的酶解液中寡肽的含量低、多肽含量高，具有投入低、操作简单、蛋白质降解效果好、肾脏多肽得率高的优势。

作为优选，原料预处理的具体步骤为：将动物肾脏洗净，沥干，切碎后再组织捣碎，按料液比为1:8-12（g/mL）加入含1-3%碳酸钠和0.031-0.038%的戊酸乙酯的水溶液，在温度为35-45℃、超声波频率为40-50kHz的条件下脱脂20-30min，弃去碱液，水洗至近中性，干燥得脱脂肾脏粉。该步骤在超声波的辅助作用下，能快速将油脂生成可溶于水的皂盐和甘油而达到脱脂的目的，脱脂率高，而的戊酸乙酯加入一方面促使游离的脂肪酸能与碱结合生成皂盐，提高脱脂效率和脱脂率，且能够将三甲胺、(E,E)-2,4-庚二烯醛等对腥味影响较大的化合物较好地除去，提高抗菌肽的品质，另一方面能够与超声波空化效应产生的H₂O₂发生协同作用，能够除去肾脏中的色素、减少蛋白质的损失，且能够避免过多的碱破坏肾脏蛋白质及其他成分，从而避免产生对肾脏多肽口感、气味和保质期影响的杂质的生成，最终提高肾脏多肽的品质和得率。