[发明专利]一种抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法

说明书

本发明公开了一种抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法，其特征在于：该方法使用的抑菌剂为天然肉桂醛精油，对链格孢菌有显著抑制作用，且最小抑制浓度（MIC）为0.2μL/mL。所述真菌毒素为Alternariol（AOH）和Alternariol monomethyl ether（AME），经过MIC和10×MIC浓度肉桂醛处理后，链格孢菌体内AOH和AME毒素含量显著下降。因此，肉桂醛精油作为一种安全无污染的天然防腐剂，不仅能控制葡萄采后病原菌链格孢菌，而且能降解其体内真菌毒素，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物防治中抑制病原菌及毒素降解技术领域，具体涉及一种抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法。

背景技术

葡萄鲜果甘甜多汁、营养丰富而深受人们的青睐。2014年中国鲜食葡萄年产量已达900万吨，位居世界首位。葡萄皮薄，肉软，含水量高，易受病菌侵染而腐烂变质。这给鲜食葡萄的贮藏、运输、延长销售时间等带来困难，造成巨大的经济损失；

葡萄采后腐烂的病原真菌主要为:灰霉、黑曲霉、青霉、根霉、链格孢和拟茎点霉等6个属。链格孢菌（Alternaria alternata）是葡萄采后优势致病菌之一，低温贮藏过程中仍能通过果梗潜伏侵染葡萄果实。在侵染部位产生局部的淡褐色或棕色腐败病斑，组织裂缝中长出绒毛状灰色真菌菌丛，果梗组织褐变腐烂，果粒脱落。此外，链格孢菌能够产生多种次级代谢产物，即链格孢毒素，可污染谷物，油籽和各种果蔬，对人和牲畜造成潜在的威胁。链格孢酚（Alternariol，AOH )和交链格孢酚单甲醚（Alternariol methyl ether，AME )为两种主要链格孢毒素，AOH和AME对哺乳动物细胞具有致突变性和细胞毒性；

肉桂醛是桂皮香料的提取物，它能够赋予食物独特的香味，同时可作为防腐剂的天然物质，已被广泛应用于食品、化妆品和医药领域。它具有杀菌、抑菌和抗氧化功效，且对多种果蔬致病菌具有很强的抑制效果。肉桂醛抑制采后真菌病害作用机理如下：1、破坏细胞壁、细胞膜功能，导致细胞内容物泄露；2、影响脂质层稳定；3、影响能量代谢及还原酶系。此外，大量文献报道肉桂醛对黄曲霉毒素具有很好的降解效果。但是，肉桂醛对采后葡萄链格孢菌的抑制及其体内毒素的降解，目前尚未有人作出相关研究。因此，该发明满足人们对鲜食葡萄的需求，以及带来巨大的生态、经济和社会效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法，用于采后葡萄致病真菌的防治，以便满足人们对鲜食葡萄的需求。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现：

1. 一种抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法，其特征在于：所述抑菌剂为天然肉桂醛精油（> 95%）；所述链格孢菌株（A-0913）分离纯化于红提葡萄果实，保存于湘潭大学生物与食品工程专业实验室；所述真菌毒素为AOH和AME毒素。

2. 一种如权利要求1所述抑制链格孢菌生长及其体内真菌毒素积累的方法，其特征在于：利用肉桂醛直接接触抑制采后葡萄链格孢菌生长，此方法包括如下步骤：

（1）制备马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB），将PDB培养基分装至150 mL锥形瓶中，每瓶100 mL，再向锥形瓶中加入吐温-80使其浓度为0.5%，于121 °C下，高压蒸汽灭菌 20 min；

（2）待所述步骤（1）中培养基灭菌完成后将其冷却至40-50 °C，加入肉桂醛使其终浓度分别为 0.00、0.0125、0.025、0.050、0.100和0.200 μL/mL，充分振荡摇匀；

（3）用6 mm的圆形打孔器在培养5 d的链格孢培养皿中打下菌苔，取2块菌苔接种到所述步骤（2）的锥形瓶中，于25 °C、150 rpm条件下振荡培养；