[发明专利]一种去除鱼类鳃中血液的方法

说明书

本发明公开了一种去除鱼类鳃中血液的方法；包括：待麻醉后的实验鱼侧卧、鳃盖停止活动后侧放于解剖盘中，由胸鳍处沿腹部中线剪开，露出围心腔，剥离开围心膜露出心脏；在鱼心室上剪一小口，将PE管一端插入鱼心室上的小口，另外一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中，同时在鱼心房处用剪刀剪开一小口；打开蠕动泵将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始冲洗去除鱼鳃中血液，冲洗后的缓冲液由鱼心房上的小口排出经集液槽排入到废液缸中；待鳃丝全部由血红色变为白色后代表血液去除完全，停止冲洗。与现有技术相比，本发明引入鱼类解剖学的方法以及蠕动泵等自动化操作方式，能够有效去除鱼类鳃中的血液。

技术领域

本发明涉及生理学领域，尤其涉及一种适用于鱼类生理学实验的方法，具体来说是在鱼类生理学实验中一种去除鱼类鳃中血液的方法。

背景技术

鱼类生理学实验是研究鱼类对环境的适应性及应激反应的重要手段，是绿色健康水产养殖技术建立的基础，同时也是评价水域环境的重要手段。

鳃是鱼类呼吸、离子调节的最重要的场所之一。从组织、细胞以及分子水平研究鱼类鳃上细胞中转运蛋白、催化蛋白的功能是揭示鱼类对外界环境的适应规律，尤其对特殊生境(例如：低氧、盐碱、高氨)的适应机制的重要实验方法。

鳃上调控蛋白常以多种亚型形式存在，有些亚型同时在血液中发挥功能。比如鱼类碳酸酐酶中的CAc亚型多存在于鳃及其他组织的上皮细胞中，而CAb亚型则存在于红细胞中。作为血液循环摄氧的重要场所，鳃中血液循环极为活跃，含血量大。研究CAc的功能，首先要去除鳃中的血液排除血液中CAb的干扰。

因此如何有效去除鱼鳃中的血液对于揭示碳酸酐酶等蛋白的作用机制尤为重要。目前国内尚没有用于去除鱼鳃中血液的成熟方法，而国外相关实验研究大都采用注射器进行洗涤，工作量和可控性较差。

发明内容

本发明的目的是建立一种去除鱼类鳃中血液的方法，解决了常规测定方法工作量大和可控性差的问题，提高去除效率和效果，为鱼类生理学研究提供基础技术。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明涉及一种去除鱼类鳃中血液专用冲洗装置，所述装置包括放置实验鱼的解剖盘、蠕动泵、缓冲液盛放缸、废液缸、集液槽和PE管；所述PE管一端插入鱼心室中，另一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中；所述集液槽设于解剖盘上，所述集液槽的出口与废液缸相连通。

优选的，所述PE管的直径为1.27mm-1.57mm。

本发明还涉及一种采用本发明所述的专用冲洗装置的去除鱼类鳃中血液的方法，所述方法包括如下步骤：

1)待麻醉后的实验鱼侧卧鳃盖停止活动后侧放于解剖盘中，由胸鳍处沿腹部中线剪开，露出围心腔，剥离开围心膜；

2)在鱼心室上剪一小口，将PE管一端插入鱼心室上的小口，另外一端经蠕动泵接入到缓冲液盛放缸中的预冷缓冲液中，同时在鱼心房处用剪刀剪开一小口；

3)打开蠕动泵将缓冲液经PE管泵入鱼血管中，开始冲洗去除鱼鳃中血液，冲洗后的缓冲液由鱼心房上的小口排出经集液槽排入到废液缸中；

4)待鳃丝全部有血红色变为白色后代表冲洗完全，停止冲洗。

优选的，步骤2)中，鱼心室上的小口的直径为1.5-2.5mm。

优选的，步骤2)中，所述将PE管一端插入鱼心室上的小口是沿鱼头部方向向前插入，直至进入鱼静脉窦4。

优选的，步骤2)中，所述预冷缓冲液为包含50IU/mL肝素锂和10^-5mol/L异丙肾上腺素的0.9％NaCl溶液。

优选的，步骤3)中，打开蠕动泵时控制流速在3060mL/min。