[发明专利]树枝状分子类阳离子脂质、转基因载体及其制备方法

权利要求书

1.一种树枝状分子类阳离子脂质，其特征在于，所述阳离子脂质的结构式(1)如下：

式(1)中，R₁为CH₃(CH₂)₂CH₂，CH₃(CH₂)₆CH₂，CH₃(CH₂)₁₀CH₂，CH₃(CH₂)₁₆CH₂，CH₃(CH₂)₇CHCH(CH₂)₇CH₂中的一种，R₂为低代树枝状聚酰胺分子。

2.根据权利要求1所述的树枝状分子类阳离子脂质，其特征在于，R₂为

3.一种制备如权利要求1或2中所述的树枝状分子类阳离子脂质的方法，其特征在于，所述阳离子脂质的合成路线如下：

所述方法具体包括：

步骤一、按比例称取式2化合物、脂肪胺R₁NH₂、催化剂、缩合剂和有机碱，加入溶剂溶解，在氮气氛围下反应8～10小时，反应结束后，减压浓缩，柱层析分离得到式3化合物；

步骤二、步骤一得到的式3化合物与Boc保护的炔丙胺式4化合物溶于四氢呋喃溶剂中得四氢呋喃溶液，将溶有硫酸铜和维生素C的水溶液加入所述四氢呋喃溶液中，室温下反应15～20小时，反应结束后，减压浓缩，柱层析分离所得化合物加入到氯化氢的饱和乙酸乙酯溶液中，室温搅拌反应0.5～1小时，将溶剂浓缩，真空干燥18～24小时，得到式1化合物阳离子脂质。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步骤一中，所述催化剂为1-羟基苯并三唑，所述缩合剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸，所述有机碱为三乙胺，所述式2化合物、脂肪胺R₁NH₂化合物，1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸和三乙胺的物质的量的比为1:1:2:2:3，柱层析分离中采用的洗脱剂为石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比为4:1。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在所述步骤二中，所述四氢呋喃溶液中的四氢呋喃和所述水溶液中的水的体积比为2:1，所述式3化合物与所述式4化合物的摩尔比为1:2.2，所述柱层析分离中采用的洗脱剂为二氯甲烷和甲醇，二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1。

6.一种转基因载体，其特征在于，包括二油酰磷脂酰乙醇胺、高纯灭菌缓冲液和权利要求1所述的阳离子脂质。

7.根据权利要求6所述的转基因载体，其特征在于，所述阳离子脂质的摩尔浓度为1.0mM，所述阳离子脂质与所述二油酰磷脂酰乙醇胺的摩尔比为1:6。

8.一种制备如权利要求7所述的转基因载体的方法，其特征在于，所述方法具体包括：将所述阳离子脂质、二油酰磷脂酰乙醇胺与无水氯仿加入到高温灭菌的烧瓶中，溶解后减压浓缩得到脂质体膜，将所述脂质体膜真空干燥去除残留氯仿，干燥后的脂质体膜与预先预热到70℃的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液混合配成所需浓度的溶液，超声得到所述转基因载体。

9.如权利要求1所述的阳离子脂质在制备转基因载体中的应用。