[发明专利]一种甘遂的快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种甘遂的快速繁殖方法，以去除顶芽并带腋芽原基的茎段为外植体，先在培养基(MS+6‑BA 1.0mg/L+IAA 3.0mg/L)中诱导出丛生芽；待丛生芽高为5cm时，将其切成1cm长的单芽，置于培养基(MS+6‑BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L)中进行壮苗培养；当单芽生长至有5‑7枚叶片时，切取其顶端长为2cm的带叶小段，置于(1/2MS+IBA 0.5mg/L)或(1/2MS+IBA 1.0mg/L)中进行生根培养。该方法萌发效率高，繁殖系数高，育苗速度快，可为甘遂的人工栽培提供大量的种苗，减少对其野生资源的破坏。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种甘遂的快速繁殖的方法。

背景技术

甘遂(Euphorbia kansui Liou)是大戟科(Euphorbiaceae)大戟属(Euphorbia)的多年生草本植物，是我国特有的一种传统中药，在历代本草中均有记录[中国科学院西北植物研究所编著，1974]。其药用价值始载于《神农本草经》[神农本草经，1995]，入药部位是干燥块根，苦寒有毒，可治疗水肿、咳喘、肿瘤、大小便不通等病症，具除水、利尿、通便等药用功效。现今甘遂集中分布在山西、陕西、河南、宁夏和甘肃等地，其中陕西为优秀甘遂的主产地[权宜淑，1994]，多生于田埂、低山坡、沙地和路旁等。近年来研究发现甘遂乳汁中含有多种有效化学成分，如二萜脂类，可显著地抗癌、抗病毒等[Dickenson and Fairbaim,1975；潘勤和闵知大，2003；郑维发，2004]，因此甘遂被视为重要的抗癌、抗病毒药材，收录于历版《中华人民共和国药典》中[中华人民共和国卫生部药典委员会，2015]。但是，甘遂种子萌发率低，大面积繁殖收到了限制，因此，需要建立一种快速繁殖的方法满足市场对甘遂药材原植物的需要。

广义的植物组织培养是无菌前提下，将离体的器官如根、茎、叶、花、果实等作为外植体或植物体原生质体放入人工配制的培养基上培养，在适当条件下，使其形成完整的植株，也叫作植物的离体培养。完整过程是：器官或组织通过脱分化产生愈伤组织，愈伤再分化出现新的组织或器官，长成完整植株。植物组织培养是建立转基因体系的前提和基础。一般以器官或分生组织等为外植体的再生途径有两种：直接诱导外植体长出器官，长成植株，即器官发生(organogenesis)和诱导体细胞胚胎的发生，进而完成植株再生，即胚状体发生(embryogenesis)。植物组织培养可在短时间内快速获得大量的无菌苗，不仅缩短了时间，且保留了植株母体的优良性状。植物细胞和组织培养现也已成为用于生产和积累许多有价值的生物活性化合物的替代系统，这种系统安全且低成本，因为它有许多益处以使化合物在自然生产过程的诸多问题最小化，从而允许这些化合物可以连续、可靠和可预测的生产，并且在良好的控制条件下可以不受季节变化的影响优化和增强它们的生物合成[et al.,2009]。

影响植物组织培养的主要因素有：

1.1外植体的选择及消毒

选择合适的外植体，是直接决定组织培养成功的第一步。理论上植物体的任何器官或组织都具有全能性，都可以重新分化形成新的植物体，但植物不同器官或组织、不同发育阶段和不同的生理状态时具有的脱分化和再分化的能力存在极大的差异。外植体的取材部位、材料处理大小及采集材料的时间等也影响了组织培养的成败。