[发明专利]一株防治土传青枯病的噬菌体及其应用

说明书

本发明公开一株防治土传青枯病的噬菌体及其应用，该株茄科劳尔氏菌专性噬菌体NN‑P42，于2018年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 2018102，分类命名为Podoviridae phage。利用该病原菌特异性噬菌体进行生物防治，能够高效裂解细菌使其死亡，且对环境没有毒性；特异性强，不会破坏其他正常菌群，可保持土壤微生物平衡。本发明的噬菌体能够特异性裂解青枯病病原菌，可用于番茄土传青枯病的防治。

技术领域

本发明属于环境友好型生防制剂，涉及一株短尾噬菌体NN-P42及其应用，专用于防治土传青枯病问题。

背景技术

番茄青枯病是由茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种细菌性维管束病害)，对茄科作物具有毁灭性的灾害。青枯菌寄主范围广，环境适应能力强，变异大，具有复杂的种内遗传。目前在我国大部分地区都有青枯病发生，但南方地区发病严重。传统的防控措施如抗性品种、嫁接轮作、化学农药等具有研发困难、效果不稳定、破坏土壤生态以及食品安全的问题，亟需开发环境友好型的防控措施。

植物根际的微生物群落具备“本能”抵御土传病害的能力，构筑了病原菌入侵植物的第一道防线。土壤微生物主要通过资源竞争、拮抗竞争、诱导植物抗性、捕食及寄生等途径防控病害。但根际有一类更微小但数量丰富的群体-细菌病毒的生防潜力被忽视了。细菌病毒又称之为噬菌体，广泛存在于环境中，其数量是细菌的10倍以上。其中裂解性噬菌体依赖宿主复制并裂解宿主细菌，是主要的生防“后备军”。

噬菌体具有宿主特异性和高效裂解及快速增殖的能力，相比细菌抗生素抗性的单向进化，噬菌体与宿主细菌协同进化更具有生防应用的优势。随着对噬菌体的生物学特性、噬菌体与宿主菌的相互作用关系的研究，对噬菌体安全性和可控性的掌握，噬菌体基因组研究的深入以及通过生物技术对噬菌体的改造研究，噬菌体在生物防控方面将发挥其巨大的应用潜力。针对以上技术问题需要筛选一株裂解性青枯菌的专性噬菌体。

发明内容

针对目前番茄青枯病的生物防治提供一种新的思路和手段，减少病害的发生。利用病原菌特异性噬菌体进行生物防治，能够高效裂解细菌使其死亡，且对环境没有毒性；特异性强，不会破坏其他正常菌群，可保持土壤微生物平衡。本申请人在青枯病发病严重的根际土壤中分离筛选到一株裂解性青枯菌专性噬菌体，并对其生物学特性及裂解性能进行研究。

本发明的另一目的在于提供一种利用此噬菌体快速有效抑制青枯菌的方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一株茄科劳尔氏菌专性噬菌体NN-P42，于2018年3月6日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 2018102，分类命名为Podoviridae phage。

该茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanancearum)专性噬菌体NN-P42分离自青枯病发病严重的根际土壤中，为有尾噬菌体目短尾噬菌体科，基因组大小约为42.28kb。噬菌体培养液过滤除菌后于4℃下可以保存2个月以上，于-70℃下保存于甘油管中可以保存2年以上；所述噬菌体培养液储液浓度为10¹¹PFU/mL。在25℃下7天内可以保持较高活性；37℃下通过添加 30％甘油或SM缓冲液可以保持较高的活性。在低资源水平下噬菌体具有稳定的裂解能力。

该茄科劳尔氏菌专性噬菌体NN-P42在防治土传青枯病或制备防治土传青枯病噬菌体制剂的应用中效果显著。

一种防治土传青枯病的噬菌体制剂，该噬菌体制剂中包含上述的茄科劳尔氏菌专性噬菌体NN-P42。作为一种优选技术方案，该噬菌体制剂中噬菌体的含量≥10⁶PFU/mL，进一步优选的，该噬菌体制剂中噬菌体的含量10⁶～10¹¹PFU/mL。该噬菌体制剂可以为噬菌体培养液，该噬菌体制剂中还添加有SM缓冲液或30％甘油。