[发明专利]一种灵芝分子量特征图谱的建立方法及其应用

说明书

本发明公开了一种快速分析灵芝活性成分多糖（肽）分子量特征图谱的方法及应用。该方法采用凝胶过滤色谱法（GFC），以右旋糖酐系列分子量为参照物，以0.05%叠氮钠水溶液为流动相，通过色谱柱串联进行HPLC检测。灵芝提取物直接用流动相溶解，过膜后上机检测，得到灵芝分子量特征图谱，由8种不同多糖（肽）峰位分子量组成，而且赤芝和紫芝提取物具有基本相同的分子量特征图谱。木屑和六种不同菌草栽培灵芝子实体分子量图谱基本一致，由9种不同多糖（肽）峰位分子量组成。本发明通过多糖（肽）分子量特征图谱可鉴别灵芝提取物的质量及其生产中是否添加麦芽糊精等辅料问题。

技术领域

本发明涉及一种灵芝分子量特征图谱，特别是一种灵芝分子量特征图谱的建立方法及其应用。

背景技术

灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，是我国传统的名贵中药材，在《神农本草经》中被列为上品。2010年版《中国药典》规定，灵芝药材来源于赤芝[Ganoderma lucidum(Leyss.ex Fr.) Karst.]或紫芝(Ganoderma sinense ,Zhao.Xu et Zhang)的干燥子实体，其化学成分较为复杂，有多糖（肽）类、三萜类化合物、甾醇类、生物碱类和核苷等多种成分。现代研究证明灵芝有广泛的药理作用，如：具有免疫增强作用、抗肿瘤、抗氧化及抗衰老作用等，可用于防治肿瘤、慢性支气管炎、神经衰弱等（林志彬. 灵芝的现代研究（第四版）.北京:北京在学医学出版,2015:129-221.）。灵芝多糖肽是灵芝活性成分的一个重要组分，最近研究发现灵芝多糖肽通过消除氧化应激预防肾缺血再灌注损伤（D. D. Zhong, H. K.Wang, M. Liu et al., “Ganoderma lucidum polysaccharide peptide prevents renalischemia reperfusion injury via counteracting oxidative stress,” ScientificReports, vol. 5, article 16910, 2015）。

近年来，灵芝质量因生产地、菌种、栽培条件、采收期及技术的不同，导致灵芝药材的质量差异很大，大量人工栽培的灵芝子实体、菌丝体、提取物和加工产品质量良莠不齐，缺乏科学有效的质量标准和检测方法。为了避免因质量差异影响到灵芝原料药的研究和进一步开发利用，有必要建立建立全面系统的控制灵芝品质的方法。文献大多采用低分子的灵芝三萜或甾醇等为参照物，评价各地的灵芝提取物的质量，而忽视灵芝提取物的主要活性成分之一的多糖肽（Fan L,Yu L,Yu HL et,al. Determination of ThreeTriterpenoid Acid in Ganoderma and Its Characteristic Chromatograms[J]. ChinJ Mod Appl Phartt,2016,33(8):1040-1045;He CL, Zhang P, Ju AH et,al. HPLCfingerprints of ultrafine powder, ordinary powder and extracts of ganoderma:A comparative analysis,2017,32(2):575-578;简伟明,刘小慧,梁慧佳,等.破壁灵芝孢子粉甾醇类 HPLC 指纹图谱的建立及其抗肿瘤活性“谱效”关系[J].江西农业学报,2016,28(8):61-65.）。王浩豪等人曾建立灵芝孢子粉单糖的HPLC指纹图谱（王浩豪,戴军,陈尚卫,等.灵芝孢子粉多糖的PMP-HPLC指纹分析[J].食品与发酵工业,2011,37(12):133-136.），前处理多糖先酸水解，再进行PMP衍生化，该方法前处理操作过程繁琐。灵芝化学成分复杂，且灵芝三萜、甾醇等低分子活性物质含量极低，对照品很难获得，对灵芝缺乏整体、科学的质量控制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，而提供一种灵芝分子量特征图谱的建立方法及其在鉴别灵芝产品质量方面的应用。