[发明专利]一种测定多肽中活性诱导物质的方法

说明书

本发明提供一种测定多肽中活性诱导物质的方法，具体涉及多肽药物检测技术领域，包括如下步骤：S1、取IPTG对照品，以50％乙腈水溶液为溶剂，配制IPTG对照品溶液，取多肽制剂，用50％乙腈水溶液溶解，得供试品溶液；S2、平行配制两份IPTG对照品溶液，经UPLC‑MS法检测，分别获得对照品溶液中IPTG的峰面积，计算峰面积与对照品溶液的浓度的比值，得IPTG的响应因子；S3、取供试品溶液经UPLC‑MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用响应因子计算供试品溶液中IPTG的含量。本发明具有检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的优点。

技术领域

本发明属于多肽药物检测技术领域，具体涉及一种测定多肽中活性诱导物质的方法。

背景技术

异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是β-半乳糖苷酶的活性诱导物质，诱导效率高，同时不被菌体代谢，诱导效果稳定，而被实验室广泛应用，但因为IPTG对细胞存在毒性，使得含质粒细菌丢失质粒，因此需要控制其在药物的含量，但目前并无质量标准收录IPTG的含量测定方法。

因此，急需一种检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的测定多肽中活性诱导物质的方法。

发明内容

为了解决现有异丙基硫代半乳糖苷含量测定无质量标准可查的问题，本发明的目的是提供一种测定多肽中活性诱导物质的方法，具有检测时间短，准确度好，精密度高，重复性好的优点。

本发明提供了如下的技术方案：

一种测定多肽中活性诱导物质的方法，包括如下步骤：

S1、取IPTG对照品，以50％乙腈水溶液为溶剂，配制IPTG对照品溶液，取多肽制剂，用50％乙腈水溶液溶解，得供试品溶液；

S2、平行配制两份IPTG对照品溶液，经UPLC-MS法检测，分别获得对照品溶液中IPTG的峰面积，计算峰面积与对照品溶液的浓度的比值，得IPTG的响应因子；

S3、取供试品溶液经UPLC-MS法检测，获得供试品溶液的峰面积，用响应因子计算供试品溶液中IPTG的含量。

优选的，所述S2步骤和所述S3步骤中UPLC-MS法的色谱条件为：采用HILIC色谱柱，柱温为35℃，选择正离子模式，定量离子为261，以甲酸-乙腈为流动相A，甲酸-水为流动相B，流动相流速为1mL/min；梯度洗脱程序为：0～2min，流动相B的体积百分数为3％；2～3min，流动相B的体积百分数由3％至15％；3～5min，流动相B的体积百分数为15％；5～5.1min，流动相B的体积百分数由15％至3％；5.1～7min，流动相B的体积百分数为3％。

梯度洗脱程序