[发明专利]鲜藻液的制备方法及其用途

说明书

本发明提供了一种鲜藻液的制备方法及其用途。本发明的鲜藻液的制备方法是藉由无菌培养及冷冻静置后再迅速升温，以达到缩短培养天数的功效；由前述制备方法所获得的鲜藻液的藻细胞不但不产生变异且重金属含量低，更可达到有效抗癌症的用途。

技术领域

本发明是关于一种鲜藻液的制备方法，尤其是指藉由无菌培养以获得鲜藻液的制备方法。本发明还关于一种前述制备方法所得的鲜藻液，尤其指所含藻细胞无变异的鲜藻液。本发明还关于一种前述鲜藻液的用途，尤其指鲜藻液用于抗癌症的用途。

背景技术

绿球藻(Chlorella)是一种浮游生物，且当该藻体族群浓度比例过高时，藻细胞即会产生自体消化的现象，以维持藻体族群优良的生存、繁殖环境，而产生自体消化的藻细胞，会产生对生物体有害的物质，藻体亦会产生异味。由于绿球藻对于他种生物而言是极为营养的天然物质，因此在自然环境中，常会成为他种生物寄生体，然而，当藻细胞被寄生时，会使藻体产生不可预知的细胞变异。此外，绿球藻本身能够有效地吸附如重金属、农药、化学毒素、多氯联本、戴奥辛、辐射等毒素，但当绿球藻吸附一定量的毒素时亦会使藻细胞产生变异。

现有研究显示，在急流水处是看不到浮游藻类生存繁殖的，如图3所示，现有技术中绿球藻的培养模式却都需依靠强力的水流搅拌、发酵培养及开放式培养(通气培养)，才能使藻细胞不沉淀，只要停止水流搅拌，藻细胞即沉淀死亡。因此，现有商业化培养、生产的绿球藻产品，皆属细胞已产生变异的藻体，非原始的绿球藻藻体。此外，绿球藻细胞若经超过50摄氏度以上的热破坏、处于无水分状态(喷雾干燥、冷冻干燥)、高温破壁处理、高浓度且温度高于0摄氏度存放超过6小时以及处于静止状态2小时，皆会使藻细胞会沉淀或使细胞产生变异。再者，目前检测绿球藻产品的CNS检验标准的重金属含量合格标准从原本5ppm改为20ppm以下，由此可见，现有技术绿球藻培养方法所生产所得的绿球藻不但皆已变异，且是充满环境污染毒素的变异藻细胞。

发明内容

鉴于现有技术培养绿球藻的方法不但培养时间长、高温及破坏细胞壁处理会导致绿球藻的藻细胞变异及变性(degeneration)、充满污染毒素以及绿球藻细胞沉淀死亡的缺点，故本发明的一个目的在于提供一种鲜藻液的制备方法，藉由无菌培养及冷冻静置后再迅速升温，以达到缩短培养天数、不造成绿球藻的藻细胞变异以及重金属含量低的功效。

为达上述目的，本发明提供一种鲜藻液的制备方法，其包括以下步骤：

将绿球藻于无菌设备中培养不超过3天，其中浓度培养达万分之5以上，培养停留时间不超过6小时，以获得培养混合液；其中所述绿球藻可为小球属(Chlorella)；

将培养混合液迅速降温至1℃以下但不结冰并进行离心，且加入无菌水以获得藻液，其中藻液的浓度介于每毫升2.5毫克(mg/mL)至12.5mg/mL；

将藻液冷冻于0℃以下呈全结冻状态并静置12小时至24小时，再于10分钟内升温至40℃至50℃，以形成鲜藻液。

较佳的，所述的绿球藻为蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)。

较佳的，所述的将绿球藻于无菌设备中培养时，搅拌培养液的流速介于每分钟3米(m/min)至每分钟20米。

更佳的，所述的将绿球藻于无菌设备中培养时，于光照条件下使绿球藻吸收碳源；当混合培养液的酸碱值低于6.8时，停止搅拌且同时维持该混合培养液呈现静止悬浮状态(不得沉淀)，待该混合培养液的酸碱值为7以上后再启动搅拌，让该混合培养液吸收碳源。

较佳的，所述的将藻液冷冻静置再升温时，可藉由微波或红外线进行升温。

较佳的，所述的将藻液冷冻于0℃以下呈全结冻状态并静置12小时至24小时的步骤中，冷冻的温度介于-1℃至-21℃。