[发明专利]一种海带抑藻活性物质的分离纯化方法与用途

说明书

一种海带抑藻活性物质的分离纯化方法：海带干粉用无水甲醇浸提后减压蒸干得浸膏；浸膏用甲醇水溶液醇淀；上清液加乙酸乙酯萃取减压蒸干，下层蒸出乙酸乙酯后加正丁醇萃取，分别减压蒸干得组份B和C；采用硅胶柱层析进行分离得B1、B2和C2，采用凝胶柱层析进行分离，以甲醇为洗脱液；经过分离得到组份抑藻活性组份B13、B21和C21，B13和C21采用硅胶薄层层析；最后得到纯度已达薄层纯的抑藻活性组份B21、B131、B132、C211和C212。本发明在活性追踪的基础上建立海带抑藻活性物质的分离纯化方法，从海带中分离得到几种抑藻活性物质，使海带可以应用于赤潮微藻治理中。其方法设计合理，分离得到的物质纯度高，抑藻活性好。

技术领域

本发明涉及一种抑藻活性物质的分离纯化方法，特别是海带抑藻活性物质的分离纯化方法。本发明还涉及前述分离纯化方法得到的物质的用途。海洋生化工程领域。

背景技术

海带（Laminaiia japonica）是一种经济价值较高的大型海洋褐藻，其鲜品营养价值很高，含有大量的糖、蛋白质、维生素等，经烹调后可食用，同时也是鲍类养殖的主要馆料之一。海带还含有丰富有机碘，可治疗和预防甲状腺肿大病。除了食用和药用价值外，海带还是经济价值很高的工业原料，其干品是提取褐藻酸、甘露醇的重要原料。目前，国内外对海带生物活性物质的研究，主要集中在海带多糖的研究，如褐藻胶、褐藻糖胶、褐藻淀粉等多糖的提取工艺，以及海带多糖的抗菌、抗氧化、抗肿瘤和抗病毒等活性。近几年，海带栽培的生物修复研究也见报道。然而，关于海带抑制赤潮微藻生长的研究较少。目前，仅发现海带的鲜组织培养水滤出液对三角褐指藻的生长能产生抑制作用，海带蛋白能抑制塔玛亚历山大藻和中肋骨条藻的生长。关于海带中抑制赤潮微藻生长的抑藻活性物质的分离纯化，国内外尚未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的海带抑藻活性物质的分离纯化方法，分离得到纯化的抑藻活性物质。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了前述抑藻活性物质的用途。

本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种海带抑藻活性物质的分离纯化方法，其特征在于，其步骤如下：

（1）海带干粉末加入无水甲醇，15-20℃下浸提12h后，获得浸提液；反复浸提3次，合并浸提液；经过滤和减压蒸干，制备到海带浸膏；浸膏加入90%甲醇水溶液，充分振荡，4℃下静置过夜，离心、过滤，去除沉淀，保留上清液；检测上清液具有抑制了米氏凯伦藻的生长活性；

（2）将上清液加入乙酸乙酯萃取3次；上层减压蒸干，获得组份A；下层减压蒸发出乙酸乙酯后，加入正丁醇萃取3次，上层和下层分别减压蒸干，获得组份B和组份C；组份B和组份C均对米氏凯伦藻的生长具有强烈的抑制作用；

（3）组份B和组份C采用硅胶柱层析进行分离，分离后，组份B获得2个再分组份，B1和B2；组份C获得3个再分组份，C1、C2和C3；抑藻活性检测得到具有明显的抑米氏凯伦藻活性的组份B1、B2和C2；将B1、B2和C2组份采用凝胶柱层析进行分离，以甲醇为洗脱液；经过分离，从B1中分离得到组份B11、B12和B13；从B2中分离出B21；从C2中分离得到C21和C22，共6个组份，抑藻活性检测得到具有明显的抑米氏凯伦藻活性的组份为B13、B21和C21，组份B21纯度已达薄层纯；组份B13和C21采用硅胶薄层层析进行制备，分别得到纯度已达薄层纯的抑藻活性组份B131和B132，以及C211和C212。

本发明所述的海带抑藻活性物质的分离纯化方法，其进一步优选的技术方案是：步骤（3）中，组份B和组份C均采用硅胶柱层析进行分离，洗脱液均为体积比为1:5的氯仿/甲醇，流速为1.0 mL/min，洗脱2倍柱体积；所有馏分减压浓缩，点样于硅胶GF254薄层层析，以体积比为1:10氯仿/甲醇为展开剂；合并相同馏分后，组份B获得2个再分组份，B1和B2；组份C获得3个再分组份，C1、C2和C3。