[发明专利]一种绶草种子快速育苗的方法

权利要求书

1.一种绶草种子快速育苗的方法，其特征在于：所述的方法包括以下依序进行的步骤：

（1）外植体的采集阶段

于每年5月至6月采集带有发育饱满的蒴果的绶草果穗备用；所述的发育饱满的蒴果为果荚微黄的且即将裂开或刚裂开的蒴果；

（2）装袋

将步骤（1）采集的蒴果及从蒴果中脱离的种子装入纱网灭菌袋中；

（3）灭菌处理

将步骤（2）的装有蒴果及从蒴果中脱离的种子的纱网灭菌袋进行灭菌处理，取出灭菌好的蒴果及从蒴果中脱离的种子，放入铺有无菌滤纸的无菌容器内备用；

（4）初代培养阶段

将步骤（3）灭菌处理后的蒴果中的种子剥离出来，并且将从蒴果中剥离出来的种子和从蒴果中脱离的种子共同接种到初代培养基进行初代培养至萌发形成原球茎或小芽；其中，所述的初代培养环境温度为21-25℃，光照强度为2500-3500Lx，光照周期为10-14 h/d，培养周期为20-40天；

（5）继代成苗阶段

将步骤（4）初代培养萌发所形成的原球茎或小芽，接种到继代壮苗与生根培养基中进行继代培养；其中，所述的继代培养的培养环境温度为21-25℃，光照强度为3000-4500Lx，光照周期为10-14 h/d，培养周期为50-90天；

步骤（4）所述初代培养基为：优化后的MS培养基中加入60-85 g/L 土豆泥、0.2-0.5g/L花宝1号、0.7-0.9g/L蛋白胨、10-18 g/L蔗糖和6-9 g/L琼脂，所述的初代培养基的pH值为5.3-5.6；

步骤（4）所述优化后的MS培养基由以下组分按照以下质量浓度配制而成：硝酸铵1645-1655mg/L、硝酸钾1895-1905mg/L、氯化钙435-445mg/L、硫酸镁365-375mg/L、磷酸二氢钾165-175mg/L、碘化钾0.80-0.85mg/L、硼酸6.0-6.5mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.0-37.5mg/L、硫酸锰22.0-22.5mg/L、硫酸锌8.4-8.8mg/L、钼酸钠0.22-0.27mg/L、硫酸铁27.5-28.0mg/L、V_B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、V_B60.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L和肌醇95-105mg/L；

步骤（5）所述继代壮苗与生根培养基为：1/2 MS培养基中加入0.5-1.0mg/L 的ABT生根粉、65-95g/L的香蕉泥、0.2-0.5g/L活性炭、5-10g/L水解酪蛋白、2-5g/L酵母提取物、10-15g/L蔗糖和6-10g/L琼脂，所述的继代壮苗与生根培养基的pH值为6.0-6.2。

2.根据权利要求1所述的一种绶草种子快速育苗的方法，其特征在于：步骤（2）装袋时，每15~30个蒴果装一袋。

3.根据权利要求1所述的一种绶草种子快速育苗的方法，其特征在于：

步骤（2）所述的纱网灭菌袋的制备方法为：将长为6-10cm、宽为3-5cm的条形纱网沿长度方向对折，然后将两侧用线固定并留下一侧开口，所述的纱网的目数为100~300目。

4.根据权利要求1所述的一种绶草种子快速育苗的方法，其特征在于：

步骤（3）所述的灭菌处理包括以下依序进行的步骤：

①将步骤（2）中所准备的装有蒴果及从蒴果中脱离的种子的纱网灭菌袋用清水冲洗干净；

②转移到灭菌后的超净工作台上，转入无菌瓶一内，倒入能够淹没整个装有蒴果和从蒴果中脱离的种子的灭菌袋的无菌水进行冲洗；

③加入体积百分比浓度为70%-74%的酒精直至淹没装有蒴果及从蒴果中脱离的种子的纱网灭菌袋，灭菌30-45秒，用无菌水进行冲洗；

④倒入质量百分比浓度为0.05-0.15%的升汞直至淹没装有蒴果及从蒴果中脱离的种子的纱网灭菌袋，再添加3-6ml吐温20到溶液中，灭菌3-6分钟；

⑤最后将装有蒴果及从蒴果中脱离的种子的纱网灭菌袋转移至干净的无菌瓶二内，用无菌水进行冲洗，取出并放置于盛有无菌滤纸的盘子上，用无菌滤纸吸去纱网灭菌袋表面多余的水分，用无菌镊子解开纱网灭菌袋取出灭菌好的蒴果，放入干燥的无菌瓶三内备用。

5.根据权利要求1所述的一种绶草种子快速育苗的方法，其特征在于：步骤（5）所述继代壮苗与生根培养基为：1/2 MS培养基中加入0.8mg/L 的ABT生根粉、65-95g/L的香蕉泥、0.2-0.4g/L活性炭、10g/L水解酪蛋白、5g/L酵母提取物、13g/L蔗糖和9g/L琼脂，所述的继代壮苗与生根培养基的pH值为6.1。