[发明专利]一种基于高分辨率溶解曲线方法鉴别青蟹的分子标记

说明书

本发明提供一种用于鉴别青蟹的分子标记，包括有用于检测榄绿青蟹的基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，用于检测拟穴青蟹的基因片段，其其核苷酸序列为SEQ ID NO:2；用于检测锯缘青蟹的基因片段，其其核苷酸序列为SEQ ID NO:3；用于检测紫螯青蟹的基因片段，其核苷酸序列为其核苷酸序列为SEQ ID NO:4。本发明通过筛选到的分子标记，通过高分辨率熔融曲线HRM对青蟹进行分型，从而快速、准确鉴别青蟹种质，为青蟹育苗养殖提供技术支持。

技术领域

本发明属于分子辅助遗传育种技术领域，具体涉及一种基于高分辨率溶解曲线方法鉴别青蟹的分子标记。

背景技术

青蟹属(Scylla)隶属于甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapode)、短尾亚目(Brachyura)、梭子蟹科(Portunidae)。广泛分布于印度一西太平洋沿岸水域，包括东南亚、澳大利亚、日本、印度、南非等海域的红树林地区及河口内湾区，在我国主要分布于浙江、福建、台湾、广东、广西和海南沿岸水域。青蟹具有个体大、生长快、适应性强、肉味鲜美、营养丰富等特点，已成为世界性的经济养殖品种，但是随着捕捞强度的加大，海洋环境的污染，野生青蟹资源严重衰退，根据陈丕茂等人在2002-2004年各礁区拖网调查,蟹类资源密度为180.985kg·km^-2,但经济蟹类所占比例仅为26.69％，且在以往调查中出现率较高且经济价值较高的锯缘青蟹未捕到，因此青蟹的人工养殖迫在眉睫。由于不同青蟹在养殖生态学、繁殖学、营养学等生理生态方面有较大差异，不同种青蟹育苗要求不同，开展青蟹属种类的鉴定研究有助于青蟹养殖技术的发展。

因此研究和保护青蟹种质的研究和鉴定技术，对我国青蟹产业可持续发展有着重要作用。

发明内容

本发明提供一种用于鉴别青蟹的SNP分子标记，以及用于检测该分子标记的引物；通过检测该分子标记能够有效的区别青蟹的不同种，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种鉴别青蟹的SNP分子标记，所述的分子标记包括有用于检测榄绿青蟹(Scylla_olivacea)的基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1用于检测拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2

用于检测锯缘青蟹(Scylla_serrata)的基因片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO:3；

用于检测紫螯青蟹(Scylla_tranquebarica)的基因片段，其核苷酸序列为其核苷酸序列为SEQ ID NO:4；

上述的分子标记在制备鉴别青蟹品种的制品中的应用；

本发明再一个方面提供一种鉴别青蟹品种的分子标记物；其中一种分子标记物为扩增引物对；

作为本发明实施例的一种具体记载，所述的引物对，其上游引物的序列为

AATTAACTAATGACATCATCTCATGG(SEQ ID NO:5)、

下游引物的序列为CGAGTTACATCTCGTCATCATTG(SEQ ID NO:6)；

本发明再一个方面提供一种基于高分辨率溶解曲线(HRM)鉴别青蟹的方法，是通过上述的引物对待检测的青蟹的核酸样品进行扩增，在对扩增产物测序后进行HRM分析来鉴别具体种。

所述的青蟹，为拟穴青蟹、锯缘青蟹、榄绿青蟹和紫螯青蟹。

本发明还提供用于HRM分析的试剂盒，所述的试剂盒包含有上述的引物对。

本发明筛选获得了能够有效鉴别拟穴青蟹、锯缘青蟹、榄绿青蟹和紫螯青蟹的基因片段，通过高分辨率熔融曲线HRM对青蟹进行分型，从而快速、准确鉴别青蟹种质，为青蟹育苗养殖提供技术支持。

附图说明