[发明专利]一种重复片段介导的植物定点重组方法有效
| 申请号： | 201810368574.2 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN110396523B | 公开（公告）日： | 2023-06-09 |
| 发明（设计）人： | 朱健康;陆钰明;田益夫;沈润东;王木桂 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N9/22;A01H5/00;A01H6/46;C12N5/10 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重复 片段 植物 定点 重组 方法 | ||
1.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物具有从5’-3’的式I所示的结构：
Y1-Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Y2 (I)
其中，Y1为无或核苷酸序列；
Z1为第一DSB序列；
Z2为第一同源序列；
Z3为目的DNA序列；
Z4为第二同源序列；
Z5为第二DSB序列；
Y2为无或核苷酸序列；
并且，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列，所述各DSB序列各自独立地：(a)自身含有切割位点，或(b)含有当所述核酸构建物通过NHEJ方式整合入靶位点后形成的切割位点，所述第一DSB序列为10-50bp，所述第二DSB序列为10-50bp。
2.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一和第二DSB序列在gRNA的参与下被定位并切割。
3.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述各DSB序列能够被定点切割核酸酶识别并切割。
4.如权利要求3所述的核酸构建物，其特征在于，所述定点切割核酸酶选自下组：ZFN、Talen和CRISPR/Cas9、或其组合。
5.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一DSB序列、第二DSB序列能够被选自下组的酶识别并切割：Cas9、Cpf1、C2C1、C2C2、C2C3等CRISPR相关酶。
6. 如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一DSB序列、第二DSB序列能够被选自下组的酶识别并切割：Fok I。
7.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一DSB序列为15-30bp。
8.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第二DSB序列为15-30bp。
9.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一同源序列为20bp-10kb。
10.如权利要求9所述的核酸构建物，其特征在于，所述第一同源序列为30bp-5kb。
11.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述第二同源序列为20bp-10kb。
12.如权利要求11所述的核酸构建物，其特征在于，所述第二同源序列为30bp-5kb。
13.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述目的DNA序列为待敲入和/或替换的序列。
14.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述目的DNA序列为1bp-10kb。
15.如权利要求14所述的核酸构建物，其特征在于，所述目的DNA序列为5bp-5kb。
16.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物为单链DNA序列或双链DNA序列。
17.如权利要求16所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物为双链DNA序列。
18.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物的一条和/或两条DNA单链的5’末端进行磷酸化修饰。
19.如权利要求1所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物的5’和/或3’端的最末端的一个或多个碱基间的磷酸二酯键进行硫代修饰。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国科学院分子植物科学卓越创新中心，未经中国科学院分子植物科学卓越创新中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810368574.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
