[发明专利]杂交瘤细胞株及其制备方法、三环类抗抑郁药单克隆抗体及试剂盒

权利要求书

1.一种杂交瘤细胞株，其特征是：所述杂交瘤细胞株能够分泌与三环类抗抑郁药特异性结合的三环类抗抑郁药单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CGMCC No.15493。

2.一种如权利要求1所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征是：包括如下步骤：

免疫、测定血清效价、融合、细胞株筛选；

所述细胞株筛选包括如下步骤：

（1）杂交瘤细胞出现后，吸取上清液，检测活性；

（2）根据上清液活性检测结果选取合适的孔进行第一次亚克隆；

（3）待第一次亚克隆细胞团长至明显可见时，吸取上清液，检测活性；

（4）根据上清液活性检测结果选取合适的孔进行第二次亚克隆，同时扩至24孔板进行增殖；

（5）待第二次亚克隆细胞团长至明显可见时，吸取上清液，检测活性；

（6）根据上清液活性检测结果选取合适的孔扩至24孔板进行增殖；

（7）待24孔板细胞长至汇合率为80%后，吸取上清液，检测活性；

（8）根据上清液活性检测结果选取合适的孔扩至25cm²细胞培养瓶进行增殖、冻存保种。

3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征是：所述免疫步骤包括如下步骤：

（1）取6-8周Balb/c健康小鼠3只；

（2）初次免疫，取抗原与弗氏完全佐剂体积比为1:1混合后乳化，形成油包水状态，对小鼠进行皮下多点注射；

（3）二次免疫，于第14天，取抗原与弗氏不完全佐剂体积比为1:1混合后乳化，形成油包水状态，对小鼠进行皮下多点注射；

（4）第三、四次免疫，于第28天、42天，取抗原与弗氏不完全佐剂体积比为1:1混合后乳化，形成油包水状态，对小鼠进行皮下多点注射。

4.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株的制备方法，其特征是：所述测定血清效价步骤包括如下步骤：

（1）提前将预包被好的酶标板取出置于室温下至少半小时；

（2）分别对免疫小鼠进行眼眶采血；

（3）待血液完全凝固后，3000r/min离心5min，取上清液；

（4）将上清液用PBS进行倍比稀释；

（5）加样：在已恢复室温的酶标板的微孔条中，分别加入稀释后上清100μl，以PBS作为空白对照，正常鼠血清对阴性对照，置37℃温育30min；

（6）洗板：用洗板机吸去孔内液体，将洗液注满每孔，反复3次，最后在吸水纸上拍干；

（7）加酶：每孔加入酶标记物100μl，用封板膜覆盖，置37℃孵育30min；

（8）洗板：用洗板机吸去孔内液体，将洗液注满每孔，反复3次，最后在吸水纸上拍干；

（9）显色：每孔加入TMB底物100μl，用封板膜覆盖，置37℃避光孵育15分钟；

（10）终止：每孔加终止液50μl，震荡使孔内液体混合均匀，立即测试结果；

（11）读数：用酶标仪双波长读取各孔的吸光度值。

5.一种三环类抗抑郁药单克隆抗体，其特征是：由权利要求1所述的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。