[发明专利]一种从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法

权利要求书

1.一种从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）胞苷发酵液加热后经陶瓷膜固液分离、超滤膜超滤连续式预处理得到预处理液；

（2）将预处理液调酸后经过强酸性阳离子交换树脂吸附，再经氨水溶液洗脱得到洗脱液；

（3）洗脱液经加热减压除氨、活性炭脱色、过滤得到脱色液；

（4）脱色液经减压浓缩、醇沉结晶、过滤、淋洗、真空干燥得到胞苷成品。

2.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述的微生物发酵液为大肠杆菌发酵液。

3.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（1）中胞苷发酵液加热温度为70-90℃，加热时间30-60min。

4.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（1）中陶瓷膜过滤精度为0.05μm-0.8μm；超滤膜过滤精度为800-2000道尔顿。

5. 根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（2）中强酸性阳离子交换树脂为氢型强酸性阳离子交换树脂；所述氢型强酸性阳离子交换树脂为001*7、Amberlite IR-120、Dowex-50、Lewatit-100、Diaion SK-1中的一种或几种。

6.根据权利要求1或5所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（2）中预处理液调酸至pH2.0-3.0经过强酸性阳离子交换树脂吸附柱处理，上柱流速为1-5BV/h；洗脱液氨水pH值为11.3-11.8，洗脱流速为0.5-3BV/h。

7.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（3）中加热减压除氨的终点为料液pH7.2-7.8；所述活性炭为723、727、767药用活性炭、303糖用活性炭中的一种或几种，用量为0.05-0.2%，脱色温度为40-80℃，脱色时间为30-60min。

8.根据权利要求1所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述步骤（4）中胞苷醇沉结晶浓度为300-500g/L；结晶条件是：加入料液体积1-3倍的甲醇或者乙醇，于4-15℃、120-250rpm的条件下搅拌6-24h；晶体过滤后用80-90%甲醇或者乙醇按体积比1:1淋洗。

9.根据权利要求8所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述真空干燥温度为45-60℃。

10.根据权利要求1或4所述的从微生物发酵液中分离纯化胞苷的方法，其特征在于：所述超滤膜为中空纤维超滤膜，膜材料为聚醚砜；超滤温度为30-45℃，超滤压力为0.7-1.2MPa。