[发明专利]杂交瘤细胞株、CD68单克隆抗体、制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种杂交瘤细胞株、CD68单克隆抗体、制备方法及应用，该单克隆抗体采用纯化的CD68重组胞外区蛋白作为免疫原免疫动物体；将骨髓瘤细胞SP2/0与免疫后的所述动物体的B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞；筛选特异性杂交瘤细胞阳性克隆，对所述阳性克隆进行细胞克隆化，筛选出稳定分泌CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞而获得。具有特异性强、亲和力高、稳定性好、效价高的特点。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，并且更具体地，涉及到一种可产生CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞株，CD68单克隆抗体，以及该抗体的制备方法和应用。

背景技术

CD68是一种分子量为110KDa的糖蛋白，与溶酶体颗粒有关。CD68为人体许多组织中的巨噬细胞标志物，包括骨髓、脾脏、肠固有层和肺泡等。外周血的单核细胞也呈阳性反应，同时也可以研究骨髓前体细胞和外周血粒细胞。近年来有文献报道，CD68也可以作为组织细胞的标志物，主要用于巨噬细胞方面的研究以及急慢性髓样白血病和组织细胞来源的肿瘤如恶性纤维组织细胞瘤的研究。

随着肿瘤免疫学研究的日益深入，人们认识浸润在肿瘤部位的细胞能更好地反映肿瘤宿主的免疫功能。肿瘤组织内的浸润细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主，定名为肿瘤浸润性淋巴细胞和肿瘤相关性巨噬细胞(tumor-associated macrophage，TAM)。研究表明，TAM含量的高低与肿瘤转移能力的强弱有关，根据TAM的含量可判断肿瘤的进展阶段。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是炎症与肿瘤相关性的重要调节者，在肿瘤微环境中表现促肿瘤的性质，分泌生长因子和基质蛋白酶，可作为判断肿瘤预后的一项指标，也可以成为肿瘤治疗中除传统治疗对象外的另一个靶标。目前，TAM在大肠癌、乳腺癌、肺癌等肿瘤组织的关系已多有报道，可帮助肿瘤诊断和治疗。

免疫组织化学(IHC)是通过抗体与所识别的组织或细胞中的抗原成分的特异性结合，利用化学反应使标记于抗体上的示踪剂(如荧光素、酶、生物素、重金属离子等)显色，对组织切片或细胞薄片上的抗原(多肽及蛋白质)进行定性、定位的染色技术。近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的成功研发，更主要的是对肿瘤分子机制认识的不断深入，免疫组化在肿瘤的分子诊断与鉴别中的应用价值受到了普遍的认可。

在免疫组化中，CD68为人体许多组织中的巨噬细胞标志物，用于检测肿瘤血管生长情况。目前国内外CD68抗体多以多克隆抗体为主，单克隆抗体制备成本高，稳定性较差，因此，获得稳定、特异性强、活性高的用于免疫组化检测的CD68单克隆抗体对于临床诊断和科学研究有重要意义。

发明内容

本发明针对上述问题，目的在于提供一种可产生CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞株，CD68单克隆抗体，以及该抗体的制备方法和应用。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明实施例公开了一种可产生CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其于2018年3月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201823。

另一方面，本发明的实施例还公开了一种CD68单克隆抗体的制备方法，其包括：

步骤(1)采用纯化的CD68重组胞外区蛋白作为免疫原免疫动物体Balb/c小鼠；

步骤(2)将骨髓瘤细胞SP2/0与免疫后的所述动物体的B淋巴细胞融合，得到杂交瘤细胞；

步骤(3)筛选特异性杂交瘤细胞阳性克隆，对所述阳性克隆进行细胞克隆化，筛选出稳定分泌CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞，所述筛选特异性杂交瘤细胞阳性克隆通过ELISA法进行；

步骤(4)获得CD68单克隆抗体。

进一步，步骤(4)中，所述获得CD68单克隆抗体包括：

在动物体内接种所述稳定分泌CD68单克隆抗体的杂交瘤细胞，生产腹水抗体进行纯化，得到CD68单克隆抗体；或者