[发明专利]一种无血清口腔黏膜上皮细胞培养液及应用

权利要求书

1.一种无血清口腔黏膜上皮细胞培养液，包括基础培养液、必须补充因子、细胞生长因子以及细胞增殖分化的调节因子，其特征是，所述基础培养液为角质细胞无血清培养液K-sfm、无钙的DMEM、Ham’s F-12培养基，体积比为2:1:1；

所述必须补充因子包括胰岛素、双抗、L-谷氨酰胺、乙醇胺；所述细胞生长因子包括表皮生长因子、胰岛素生长因子、转化生长因子-β；所述细胞增殖分化的调节因子包括骨形态发生蛋白-4、氢化可的松、牛垂体提取物、氯化钙、ROCK激酶抑制剂、霍乱毒素；

所述的无血清口腔黏膜上皮细胞培养液，其特征是，以500ml计，各组分及用量如下：

角化细胞无血清培养液K-sfm 250ml；

无钙的DMEM培养液125ml；

Ham’s F-12培养基125ml；

表皮生长因子：终浓度为1-10ng/ml；

胰岛素生长因子：终浓度为1-20μg/ml；

氢化可的松：终浓度为2-10μg/ml；

牛垂体提取物：终浓度为5-50μg/ml；

转化生长因子-β：终浓度为0.2-2ng/ml；

L-谷氨酰胺：终浓度为200mM；

胰岛素：终浓度为1-15μg/ml；

骨形态发生蛋白-4：终浓度为1-50ng/ml；

100X青霉素-链霉素：终浓度为1X；

氯化钙溶液：终浓度为0.1-5M；

ROCK激酶抑制剂Y27632：终浓度为1-20μM；

霍乱毒素：终浓度为0.1-10nM；

乙醇胺：终浓度为1×10^-5-10×10^-5mol/L。

2.权利要求1所述的无血清口腔黏膜上皮细胞培养液在体外构建3D模型中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征是，采用权利要求1所述的无血清口腔黏膜上皮细胞培养液培养体外培养口腔黏膜上皮原代细胞，并传代至第六代；消化成单细胞后继续用所述无血清口腔黏膜上皮细胞培养液培养成单层，然后形成复层结构。

4.如权利要求3所述的应用，其特征是，所述复层结构包括基底层、棘层、颗粒层、角质层。