[发明专利]贝母多糖的制备及在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

贝母多糖的制备及在制备抗肿瘤药物中的应用，属于植物活性成分的药物医疗和保健应用领域。依次采用水提取、醇沉、Sevag法脱蛋白、透析分离纯化，然后浓缩冷冻干燥。该贝母多糖中不含有蛋白质；肿瘤包括Hela(人宫颈癌细胞)，SH‑SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)，MCF‑7(人乳腺癌细胞)，U266(人骨髓瘤细胞)、RAW264.7(小鼠腹腔巨噬细胞细胞)等。本发明将贝母多糖用于抗癌药物的制备，以供癌症的治疗使用。

技术领域

本发明涉及一种贝母多糖的抗肿瘤作用，属于植物活性成分的药物医疗和保健应用领域。

背景技术

癌症一直是影响人类健康主要疾病之一。2014年世界卫生组织(WHO)发布的《全球癌症报告》数据显示，我国的新增癌症病例高居第一位。在肝、食道、胃和肺等4种恶性肿瘤中，中国新增病例和死亡人数均居世界首位。

多糖(Polysaccharides)是一类具有广泛生物学功能的化合物，它不仅是生命体的物质基础，同时参与到细胞间的识别、机体免疫功能的调节、细胞的转化、肿瘤细胞的凋亡等生物学过程。目前对于多糖抗肿瘤、免疫调节的研究受到广泛关注。

贝母属于百合科多年生草本植物，在2015年版《中国药典》一部中收载川贝母Fritillaria cirrhosa D.Don、暗紫贝母Fritillaria unibracteata Hsiao etK.C.Hsia、甘肃贝Fritillaria przewalskii Maxim.的干燥鳞茎。贝母属药食同源植物，主要药用或食用部位是贝母鳞茎，其性苦、甘、微寒，归肺、心经，具有镇咳、祛痰、平喘、镇静、镇痛、心血管、抗溃疡、抗血小板聚集、抗肿瘤等功效。

发明内容

本发明的目的是提供一种贝母多糖的制备，及在制备抗肿瘤药物方面的新用途。

本发明的技术方案为：一种贝母多糖的制备，对贝母进行多糖提取分离、纯化后，再将多糖作用于Hela(人宫颈癌细胞)，SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)，MCF-7(人乳腺癌细胞)，U266(人骨髓瘤细胞)、RAW264.7(小鼠腹腔巨噬细胞细胞)等肿瘤细胞。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种贝母多糖的制备、表征及在抗肿瘤中的应用。

本发明所提供的贝母多糖，经测试具有一定的抗肿瘤活性，在体外给药0.043-1.4mg/mL范围内可抑制多种肿瘤细胞的生长，且呈现明显的量效关系。

本发明一种贝母多糖的制备，包括以下步骤：

1)预处理：

将贝母粉碎，如采用XDW-6J超微粉碎机粉碎，备用，优选粉碎成超微粉；

2)贝母粗多糖分离：

称取步骤1)贝母粉加入纯水，于60-80℃水浴提取0.5-2h，离心分离出上清液，将分离出固体按上述操作重复3次，将3次上清液合并；合并的上清液进行浓缩，加入无水乙醇，4℃下进行醇沉24h，离心，并用乙醇洗涤沉淀多次并边洗涤边搅拌，-60℃下真空冷冻干燥，得到灰色粗多糖；

优选每10g加入纯水50-200mL，合并的上清液浓缩至10-15mL，加入3-4倍体积的无水乙醇进行醇沉。

3)Sevag法脱蛋白：

将步骤2)所得的粗多糖用蒸馏水溶解后，加入与蒸馏水等体积的Sevage试剂震荡30min，之后离心，取上清；重复多次，上清液备用；其中Sevage试剂为氯仿:正丁醇体积比＝4:1；

4)贝母多糖透析分离纯化：

取步骤3)中上清液，放入透析袋中，在蒸馏水中透析72h，中间不断换水；所用透析袋截留分子量为3500以上；析袋中所得液体于-60℃下冷冻真空干燥，得贝母多糖。