[发明专利]一种伪狂犬病病毒抗血清及其制备方法

说明书

本发明涉及一种伪狂犬病病病毒抗血清及其制备方法。本发明旨在为伪狂犬病诊断技术、诊断试剂以及猪伪狂犬病疫苗质量监控提供满足要求的伪狂犬病病毒阳性血清。本发明所涉及的伪狂犬病病毒阳性血清特异性高，且中和效价高达1:2000倍以上，可满足伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验；另外，该发明中免疫动物采用不含有猪源常见病原体的健康山羊，在试验动物的纯净度上容易控制，免疫原为伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗，容易获得且避免使用伪狂犬病病毒强毒进行免疫，降低了生物安全风险；仅经过五次免疫就能够获得高效价的抗血清，方法简便易行，适合大规模制备。

技术领域

本发明涉及一种伪狂犬病病毒抗血清及其制备方法，属于兽用生物制品技术领域。

背景技术

伪狂犬病(Aujeszkys disease)是由疱疹病毒科中α疱疹病毒亚科猪疱疹病毒Ⅰ型引起的一种急性传染病，是目前世界上最严重传染病之一，并在我国广泛流行，已经造成严重经济损失。伪狂犬诊断技术、诊断试剂以及疫苗等是该病防制的关键。该病的诊断技术和疫苗质量监控都需要伪狂犬病病毒阳性血清，但目前尚未报道能满足使用的伪狂犬病病毒高免血清的制备方法。本发明首次以伪狂犬病活疫苗和灭活疫苗对山羊进行免疫，获得具有高中和效价的特异性阳性血清，并使得血清的纯净性更易控制和可靠，满足了伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。

发明内容

本发明的目的：提供一种用于伪狂犬病活疫苗外源病毒检验和鉴别检验所需的具有高中和效价的特异性伪狂犬病病毒抗血清。

本发明的技术方案

1.一种伪狂犬病病毒抗血清，其特征在于该伪狂犬病病毒抗血清是利用无猪病常见病原体的山羊制备而成，且该抗血清中和效价高达1:2000倍以上，可用于伪狂犬病活疫苗的外源病毒检验和鉴别检验。

2.一种伪狂犬病病毒抗血清的制备方法，其特征在于该抗血清的制备方法为：

(1)试验动物：为不含猪病常见病原体的山羊；

(2)免疫原：采用商品化的伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗；

(3)高免血清的制备：检验合格的试验用山羊以伪狂犬病灭活疫苗和活疫苗共进行多次免疫，每次免疫前检测伪狂犬抗体效价，最后一次免疫后一周血清中和抗体效价达到峰值对免疫羊采用颈动脉采血致死，分离血清；

(4)高免血清的检验：

1)物理性状、无菌检验、支原体检验：均符合要求；

2)效价测定：以中和试验和ELISA方法测定高免血清的中和效价，达1:2000以上；

3)特异性检验：检测口蹄疫、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪细小病毒病、猪圆环病毒病、伪狂犬病和牛病毒性腹泻/粘膜病抗体，均为阴性；

4)外源病毒检验：无外源病毒污染。

本发明的具体实施方式

1.伪狂犬病病毒特异性抗血清的制备

(1)试验动物：6个月龄左右、未得并未免疫口蹄疫的山羊，BVDV、伪狂犬病、布鲁氏菌病、蓝舌病、小反刍兽疫和羊痘抗体均为阴性。

(2)免疫原：伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗

(3)免疫程序：对试验用山羊以伪狂犬病灭活疫苗和伪狂犬病活疫苗进行多次免疫。

(4)血清制备：每次免疫后一周采血监测免疫后抗体水平的变化情况。最后一次免疫后一周抗体水平达到最高，颈动脉采血致死，分离血清。-20℃冷冻保存，备用。

2.伪狂犬病病毒抗血清的检验