[发明专利]一种装载DNA的布鲁氏菌菌蜕复合疫苗

权利要求书

1.一种重组布鲁氏菌，其特征在于：通过具有温控调节功能的蛋白调节噬菌体裂解蛋白E和细菌核酸酶蛋白A的含量和/或活性。

2.如权利要求1所述的重组布鲁氏菌，其特征在于：所述“具有温控调节功能的蛋白”为温敏调控蛋白cI857；所述噬菌体裂解蛋白E为噬菌体PhiX174裂解蛋白E；所述细菌核酸酶蛋白A为金黄色葡萄球菌核酸酶蛋白A。

3.如权利要求1或2所述的重组布鲁氏菌，其特征在于：所述布鲁氏菌为粗糙型布鲁氏菌或光滑型布鲁氏菌。

4.如权利要求3所述的重组布鲁氏菌，其特征在于：所述粗糙型布鲁氏菌通过将布鲁氏菌基因组中编码糖苷转移酶的基因敲除或破坏获得；所述光滑型布鲁氏菌通过将布鲁氏菌基因组中编码可溶性外周浆蛋白的基因敲除或破坏获得。

5.如权利要求1至4任一所述的重组布鲁氏菌，其特征在于：所述布鲁氏菌为猪种布氏杆菌、羊种布氏杆菌、牛种布氏杆菌、犬种布氏杆菌、沙林鼠种布氏杆菌或绵羊附睾种布氏杆菌。

6.权利要求1至5任一所述的重组布鲁氏菌的制备方法，为将含有编码权利要求1或2所述具有温控调节功能的蛋白的核酸分子、编码权利要求1或2噬菌体裂解蛋白E的核酸分子和编码权利要求1或2细菌核酸酶蛋白A的核酸分子的自杀质粒导入布鲁氏菌，利用同源重组技术获得重组布鲁氏菌。

7.一种布鲁氏菌菌蜕，是采用权利要求1至5任一所述重组布鲁氏菌制备得到的菌蜕。

8.一种装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗，是将目的DNA装载于权利要求7所述布鲁氏菌菌蜕得到的。

9.如权利要求8所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗，其特征在于：所述“目的DNA装载于所述布鲁氏菌菌蜕”是将质粒或双链DNA分子装载于所述布鲁氏菌菌蜕实现的；所述质粒或双链DNA分子含有目的DNA。

10.如权利要求8或9所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗，其特征在于：所述目的DNA为表达BLS蛋白、L7/L12蛋白和P39蛋白的重组质粒。

11.如权利要求1至5任一所述的重组布鲁氏菌、或、权利要求7所述布鲁氏菌菌蜕、或、权利要求8至10任一所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗，其特征在于：所述重组布鲁氏菌、所述布鲁氏菌菌蜕或所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗的免疫途径为b1)至b7)中的任一种：b1)皮下注射；b2)皮内注射；b3)肌肉注射；b4)腹腔注射；b5)黏膜途径；b6)口服给药；b7)鼻内给药。

12.如权利要求1至5任一所述的重组布鲁氏菌、或、权利要求7所述布鲁氏菌菌蜕、或、权利要求8至10任一所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗，其特征在于：所述重组布鲁氏菌、所述布鲁氏菌菌蜕或所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗的免疫对象为c1)至c5)中的任一种：c1)人；c2)家畜动物；c3)羊；c4)牛；c5)猪。

13.权利要求1、2、3、4、5、11或12任一所述的重组布鲁氏菌、或、权利要求7、11或12任一所述布鲁氏菌菌蜕、或、权利要求8、9、10、11或12任一所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗的应用，为a1)或a2)或a3)：

a1)预防布鲁氏菌病；

a2)制备预防布鲁氏菌病的产品；

a3)鉴别疫苗免疫和自然感染。

14.权利要求8、9、10、11或12任一所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗联合重组疫苗、亚单位疫苗或减毒活疫苗的应用，为a1)或a2)或a3)：

a1)预防布鲁氏菌病；

a2)制备预防布鲁氏菌病的产品；

a3)鉴别疫苗免疫和自然感染。

15.权利要求8、9、10、11或12任一所述装载DNA的布鲁氏菌核酸菌蜕复合疫苗和免疫佐剂的应用，为a1)或a2)或a3)：

a1)预防布鲁氏菌病；

a2)制备预防布鲁氏菌病的产品；

a3)鉴别疫苗免疫和自然感染。